Zdieľam:
Negatívny základ farbenia, technika, výhody a nevýhody
negatívne farbenie Je to špeciálna metóda farbenia na zvýraznenie prítomnosti kapsuly v niektorých mikroorganizmoch - hlavne Streptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumoniae a Cryptococcus neoformans-, z klinických vzoriek alebo čistých kultúr.
Priama vzorka, ktorá sa bežne používa na aplikáciu negatívneho farbenia, je mozgovomiechová tekutina. Táto technika predstavuje rýchlu alternatívu pre predpokladanú diagnózu meningitídy, najmä Cryptococcus neoformans.
Podobne sa toto farbivo môže aplikovať všeobecne na spúta a sterilné tekutiny, ako aj na kmene získané z mladých čistých kultúr. Táto technika používa na svoju realizáciu nigrozín alebo čínsky atrament; preto je to veľmi jednoduchá a ekonomická metodika, ktorá poskytuje informácie s veľkou diagnostickou hodnotou v krátkom čase.
V tomto zmysle je každé laboratórium schopné vykonať toto sfarbenie. Samozrejme, laboratórium musí mať kompetentný personál schopný rozpoznať kvasinky Cryptococcus neoformans izolovať alebo pučať a odlíšiť ich od leukocytov a artefaktov, ktoré môže vzorka predstavovať.
index
- 1 Nadácia
- 2 Technika
- 2.1 Materiály
- 2.2 Špecifikácie odberu vzoriek
- 2.3 Realizácia techniky s priamymi vzorkami
- 2.4 Vykonanie techniky s kmeňmi z kultúry
- 2.5 Pozorovanie v mikroskope
- 3 Výhody
- 4 Nevýhoda
- 5 Farbenie tkaniva indickým atramentom
- 6 Referencie
nadácie
Nigrosín a indický atrament pôsobia podobným spôsobom; preto môže byť jedna z týchto dvoch látok zameniteľná.
Táto technika sa nazýva negatívne farbenie, pretože pôsobí proti ostatným farbiacim technikám. V tomto zostáva nezostarená štruktúra, ktorú hľadáte alebo ktorú chcete vidieť; to znamená mikroorganizmy.
Zafarbenie je preto založené na farbení dna šmuhy v tmavej farbe. V tomto scenári budú obmedzené štruktúry zvýraznené svetlou alebo bezfarebnou farbou.
Vo všeobecnosti sú kvasinky pozorované refringentne, obklopené čírym halo, ktoré zodpovedá kapsule. K tomu dochádza preto, lebo čínsky atrament a nigrozín sú látky, ktoré nie sú schopné preniknúť polysacharidom, ktorý tvorí kapsulu živých mikroorganizmov..
Stojí za zmienku, že iné štruktúry, ktoré môžu byť prítomné v priamej vzorke, ako sú leukocyty alebo červené krvinky, nepreniknú.
Ak sú mikroorganizmy mŕtve, tinktúra môže preniknúť do nich tak, že toto farbenie je tiež užitočné na vyhodnotenie životaschopnosti mikroorganizmov..
technika
materiály
nigrosinové
Nigrozín vďačí za svoj názov čiernej farbe, ktorú má. Je to syntetická látka, ktorá sa získa zahrievaním zmesi organických zlúčenín - ako je nitrobenzín, anilín a hydrochlorid anilínu - s použitím katalyzátora (železa alebo medi) v uvedenej reakcii..
Čínsky atrament
Čínsky atrament je látka, ktorú používajú hlavne Aziati na písanie, umelecké diela a monochromatické maľovanie. Je veľmi populárny v čínskej kultúre.
Získava sa z kalamárového atramentu zmiešaného s práškovým uhlím, produktom horenia malých živicových stromov.
Je tiež možné ho pripraviť zo sadzí zo spaľovania uhľovodíkov (rastlinných olejov) spolu s proteínovou želatínou, ktorá mu dáva správnu konzistenciu, aby sa zabránilo zrážaniu uhlíkových častíc..
Špecifikácie pre odber vzoriek
- Nevyžaduje pôst.
- Vzorka CSF, spúta alebo sterilnej kvapaliny musí obsahovať najmenej 1 ml objemu a musí sa ihneď preniesť do laboratória na laboratórnu teplotu..
- CSF a sterilné kvapalné vzorky by mal odoberať špecializovaný lekár.
- Môže to byť aj čistá kultúra podozrivého kmeňa spojená s vyššie uvedenými patogénmi.
Realizácia techniky s priamymi vzorkami
- Vzorky sa musia odstrediť, potom sa supernatant vyhodí a odoberie sa sediment.
- Na čisté podložné sklíčko sa umiestni kvapka odstredeného materiálu (sediment) a kvapka čínskeho atramentu alebo nigrozínu..
- Mal by sa dobre premiešať a prikryť krycím sklíčkom, aby sa kvapka mohla roztiahnuť ako tenký film bez prekročenia okrajov.
- Následne sa prípravok namontuje do mikroskopu.
- Ak je prípravok príliš tmavý, môže byť zriedený vodou.
Vykonanie techniky s kmeňmi z kultúry
- Veľmi malá časť mladých plodín sa odoberie očkovacou ihlou a rozpustí sa v kvapke čínskeho atramentu, ktorý sa predtým umiestnil na čisté podložné sklíčko.
- Na vrch sa nachádza krycie sklíčko.
- Pozoruje sa v mikroskope pri 10X a potom pri 40X.
Môžete tiež rozpustiť časť kolónie v destilovanej vode, a odtiaľ sa kvapka a premiešajte s atramentom. Týmto spôsobom nebude príprava taká hrubá, aby bolo možné pozorovať štruktúry v izolácii; Ak existujú aglomerácie, nebude dobre pozorovaný.
Ďalšou metodikou je:
- Na jeden koniec sklíčka sa umiestni kvapka kultúry do suspenzie.
- Na ten istý koniec naneste kvapku nigrozínu a premiešajte.
- S pomocou ďalšieho sklíčka predĺžte vzorku tak, ako keby ste robili hematologický náter.
- Nechajte uschnúť a pozorujte pod mikroskopom.
Pozorovanie v mikroskope
Najprv sa musíte zamerať s cieľom 10X, aby ste mali široký pohľad na pole. Následne by ste mali vyhľadať, ak sú voľné miesta; ak sú, zamerajte sa na 40X, aby ste videli detaily.
výhoda
- Je ľahké vykonať.
- Je to ekonomická technika.
- Táto metóda nevyžaduje, aby bol náter fixovaný na teplo alebo chemikálie; preto sa mikroorganizmy pozorujú bez skreslenia.
- Čerstvý prípravok nie je potrebné sušiť, takže je možné ho okamžite pozorovať a rýchlo vytvárať výsledky.
nevýhoda
Po zostavení sa musia čerstvé prípravky okamžite pozorovať; ak sú povolené na sušenie, nie je možné ich pozorovať a nové.
Farbenie tkaniva indickým atramentom
Ďalšia funkcia, ktorú môže čínsky atrament splniť, je v patologických laboratóriách. Toto sa aplikuje na tkanivové vzorky chirurgicky odstránené, aby sa označili okraje resekcie nádoru.
Označené tkanivo sa nastrieka kyselinou octovou. Toto pôsobí ako moridlo a zabraňuje tomu, aby sa atrament pri spracovaní bioptického prípravku podrobil rutinnému spracovaniu.
Postup spočíva v kúpaní tkaniva v alkohole a xyléne a potom vmiešaní do parafínového vosku. Toto značenie vedie patológa pri pozorovaní tkaniva, pričom indikuje, kde je okraj chirurgickej resekcie alebo iný zaujímavý bod.
referencie
- "Nigrosinové". Wikipédia, slobodná encyklopédia. 11 júl 2017, 22:46 UTC. 6 jan 2019, 16:56: en.wikipedia.org
- "Čínsky atrament". Wikipédia, slobodná encyklopédia. 1. október 2018, 03:08 UTC. 6. január 2019, 18:20: en.wikipedia.org/
- Silva L, Silva C, Fernández N, Bueno C, Torres J, Rico M, Macías J a spolupracovníci. (2006). Personálne oddelenie Autonómnej oblasti Extremadura. Osobitný program Zväzok IV. Redakcia MAD. Sevilla-Španielsko, str. 211-212.
- Silva M, García M, Corrales J., Ponce E. (2006) Odborný laboratórny technik, Galician Health Service (SERGAS). Konkrétny objem predmetu 2. Redakcia MAD. Sevilla-Španielsko, str. 79-80.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Mikrobiologická diagnostika Bailey & Scott. 12 ed. Argentína. Panamericana S.A Editorial