Zafarbenie v máji Grünwald-Giemsa základ, technika a použitie



Môže sa farbiť Grünwald-Giemsa o Pappenheim je technika diferenciálneho farbenia, ktorá mieša reagencie Giemsa a May Grünwald. Používa sa na diferenciáciu normálnych a abnormálnych krvných buniek v náteroch periférnej krvi a kostnej drene, ako aj na farbenie histologických rezov a cytologických vzoriek..

Obidve reagencie - Gemsa a May Grünwald - sú odvodené z farbenia Romanowského typu, čo je technika založená na kombinácii kyselín a základných farbív..

Giemsa zlepšil techniku ​​stabilizáciou zmesi eozínu, metylénovej modrej a jej derivátov s glycerolom. Naproti tomu May Grünwald používa eozín a metylénovú modrú s použitím metanolu ako rozpúšťadla. Táto strategická kombinácia priniesla vynikajúce výsledky.

Hoci z hľadiska pozorovania morfológie buniek pôsobí podobne ako Giemsa a Wrightova farba, táto technika zlepšuje predchádzajúce techniky jemným doladením sfarbenia parazitov, ktoré spôsobujú maláriu, Chagasovu chorobu, leishmaniózu a trichomoniázu..

Okrem toho sa ukázalo, že je to veľmi užitočná technika pre cytologickú štúdiu spermatickej tekutiny. Zdôraznila sa nielen preukázaním morfologických charakteristík spermií, ale tiež umožňuje rozlíšiť s veľkou účinnosťou leukocyty, epitelové bunky a bunky spermatogenézy..

index

  • 1 Nadácia
    • 1.1 Rozmanitosť farbív
  • 2 Technika
    • 2.1 Materiály
    • 2.2 Koncentrovaný roztok farbiva May Grünwald
    • 2.3 Koncentrované farbivo Giemsa
    • 2.4 Príprava tlmivého roztoku pri pH 7,2
    • 2.5 Postup farbenia krvi alebo farbenia kostnej drene
    • 2.6 Rozšírená technika farbenia spermií
    • 2.7 Dôležité špecifikácie
  • 3 Použitie
    • 3.1 Vaginálna cytológia
    • 3.2 Vzorka spermií
  • 4 Odkazy

nadácie

Táto technika nadväzuje na základy Romanowského škvŕn, v ktorých majú kyslé farbivá selektívnu afinitu k bunkovým základným zložkám a kyslé zložky priťahujú základné farbivá..

Inými slovami, bunkové štruktúry aj farbivá majú pozitívne alebo negatívne elektrické náboje; rovnaké poplatky odpudzujú a priťahujú sa rôzne poplatky.

Napríklad bázické farbivá, ako je metylénová modrá, sú kladne nabité a priťahujú ich negatívne nabité štruktúry. To je dôvod, prečo toto farbivo farbí jadrá, ktoré sú bohaté na DNA a RNA, ktoré majú negatívne nabité fosfátové skupiny.

Granule segmentovaných bazofilov a cytoplazmy mononukleárnych bielych krviniek obsahujúcich RNA sú tiež zafarbené.

Podobne, kyslé farbivo nesie záporný náboj, čo je dôvod, prečo spája pozitívne nabité štruktúry, ako sú erytrocyty a granule segmentovaných eozinofilov. Čo sa týka granúl segmentovaných neutrofilov, tieto fixujú obidve farbivá.

Rozmanitosť farbív

V tejto technike koexistuje kombinácia reakcií medzi ortochromatickými farbivami a metachromatikou. Ortochromáty (eozín a metylénová modrá) sa viažu na bunkovú štruktúru, ku ktorej sú príbuzné a poskytujú stabilnú farbu, ktorá sa nemení..

Na druhej strane metachromatika (deriváty metylénovej modrej azúrovej A a azúrovej B) mení svoju pôvodnú farbu, akonáhle sú viazané na špecifickú štruktúru a môže existovať aj rad odtieňov..

Nakoniec, krok, ktorý vykonáva májový Grünwaldov roztok, vyžaduje prítomnosť vody, pretože bez neho bude farbivo prenikať štruktúrami, ale nebude fixované. Aby sa tak stalo, musí sa farbivo stať polárnym alebo ionizovaným, a tak byť schopné precipitovať a viazať sa na súvisiace štruktúry.

technika

materiály

- Sklíčka na diapozitívy.

- Farbenie mostov.

- Riešenie May-Grünwalda.

- Giemsa farbivo.

- Destilovaná voda.

Koncentrovaný roztok farbiva May Grünwald

Musíme zvážiť 0,25 g eozín-metylénovej modrej (farbivo podľa May Grünwald) a rozpustiť v 100 ml metanolu. Zmes sa potom mieša 1 hodinu a nechá sa stáť 24 hodín. Skončil čas, filtruje.

Na aplikáciu tejto techniky by sa malo farbivo May Grünwald zriediť nasledovne: pre 200 ml zriedeného farbiva sa zmeria 30 ml koncentrovaného roztoku, pridá sa 20 ml tlmivého roztoku a 150 ml destilovanej vody upravenej na pH 7,2-7,3. , Potom sa mieša a filtruje.

Koncentrované farbivo Giemsa

Navážte 0,5 g azur-eozín-metylénovej modrej (farbivo podľa Giemsa), rozpustite v 50 ml metanolu a do zmesi vložte 50 ml glycerínu..

Na vykonanie tejto techniky sa zriedi 1:10 roztokom pufra a nechá sa 10 minút odstáť. V prípade potreby sa môže filtrovať.

Príprava tlmivého roztoku pri pH 7,2

Musia sa zvážiť: \ t

- 40 mg dihydrogenfosforečnanu draselného (KH2PO4).

- 151 mg dihydrátu hydrogenfosforečnanu sodného (Na2HPO4).

Obe zlúčeniny sa rozpustia v 100 ml vody.

Postup farbenia krvi alebo farbenia kostnej drene

Existujú dve formy: klasická a rýchla.

Klasický režim

  1. Šmouhy zakryte 2 alebo 3 minúty zriedeným roztokom May-Grünwald.
  2. Na odstránenie predchádzajúceho roztoku sa premýva pufrovanou destilovanou vodou.
  3. Zakryte rovnakým tlmivým roztokom a nechajte 1 minútu. Predpokladá sa, že predchádzajúce farbivo je fixované na štruktúry a zároveň sú bunky hydratované.
  4. Pridajte 12 kvapiek zriedenej tinktúry Giemsa na pufrovanú vodu a vyfúknite, aby sa premiešala a homogenizovala. Nechajte stáť 15 alebo 20 minút.
  5. Umyte šmuhy pufrovanou destilovanou vodou a umiestnite do sucha na vzduchu.
  6. Zaostrite a pozorujte v optickom mikroskope krvinky zafarbené s použitím objektívu 40X. V prípade potreby sa môže použiť 100X.

Rýchly režim

  1. Obal zakryte farbivom May Grünwald, ktoré sa riedi 1 minútu.
  2. Premyte pufrovanou destilovanou vodou.
  3. Zakryte pufrovanou vodou a nechajte stáť 1 minútu.
  4. Zriedené farbivo Giemsa sa umiestni na 5 minút.
  5. Premyte pufrovanou destilovanou vodou a nechajte uschnúť na vzduchu.

Techniky opísané v tomto dokumente sú vodítkom, ale je potrebné vziať do úvahy, že postupy a časy sfarbenia sa líšia podľa komerčného domu, ktorý dodáva reagencie. Odporúča sa postupovať presne podľa pokynov uvedených v každom komerčnom dome.

Spermová tekutina rozšírená technika farbenia

1 - Šírku prikryte tenkou vrstvou May Grünwaldovho roztoku počas 4 minút.

2- Vyberte farbivo a premyte destilovanou vodou.

3- Vrstva zriedeného Giemsa (1:10) sa umiestni na 15 minút do destilovanej vody.

4- Odstráňte farbivo a premyte destilovanou vodou.

5- Nechajte uschnúť a pozorujte pod mikroskopom.

Dôležité špecifikácie

Technika vyžaduje, aby činidlá a premývacie roztoky mali pH upravené na 7,2 až 7,3, takže afinity farbív pre bunkové štruktúry nenarušujú a nemenia konečnú očakávanú farbu..

aplikácie

Túto techniku ​​používajú klinické laboratóriá na farbenie škvŕn periférnej krvi a kostnej drene, tkanivových rezov a cytologií.

V hematologickom poli má táto technika zásadný význam pri štúdiu abnormalít buniek z hľadiska tvaru, veľkosti a počtu. Je to veľmi cenný nástroj na diagnostiku niektorých chorôb, ako je leukémia a anémia.

Okrem toho predstavuje vynikajúci úžitok pri hľadaní parazitov v hematologických oblastiach (Plasmodium sp a Trypanosoma cruzi) alebo histologické (\ tLeishmanias sp).

Vaginálna cytológia

Čo sa týka vaginálnej cytológie, táto technika je obzvlášť výhodná na pozorovanie Trichomonas vaginalis. Toto je dôležité zistenie, pretože jeho prítomnosť simuluje obrazy karcinómu in situ ktorý potom zmizne, keď je parazit eliminovaný.

Vzorka spermií

Je ideálnym nástrojom na štúdium vzoriek spermií, pretože poskytuje cenné informácie o kvalite spermií.

Údaje, ktoré ponúka, súvisia najmä s počtom a morfológiou, ako aj so sprievodnými bunkami, ktoré môžu byť prítomné a ktoré sú životne dôležité, ako sú zárodočné bunky, leukocyty a epitelové bunky..

Pomocou tejto analýzy je možné opísať abnormality pozorované v spermiách v hlave, krku, strednej časti a hlavnej časti.

Okrem toho môžu tiež pomôcť ukázať prípady hemospermie (prítomnosť červených krviniek v semene) a leukozpermia alebo pyospermia (zvýšenie počtu leukocytov v semene)..

referencie

  1. Costamagna S, Prado M. Validácia čerstvého testu, May Grünwald-Giemsa a Gram farby a kultivačné médiá na diagnostiku Trichomonas vaginalis. Parasitol. 2001; 25 (1-2): 60-64. K dispozícii v: scielo.
  2. Laboratórium spoločnosti Merck KGaA. Máj Grünwald eozín metylénová modrá pre mikroskopiu.
  3. "May-Grünwald-Giemsa škvrna." Wikipédia, slobodná encyklopédia. 15 nov. 2018, 14:37 UTC. 8 január 2019, 04:29: en.wikipedia.org
  4. Laboratórne sklo Chemikálie Panreac. Činidlá pre histologické techniky, hematológiu a mikrobiológiu. K dispozícii na: glasschemicals.com
  5. Retamales E, Manzo V. Odporúčanie na farbenie krvných náterov na čítanie krvného obrazu. Národné a referenčné biomedicínske laboratórium. Ústav verejného zdravia Čile.
  6. Sarabia L. Spermiogram podľa kritérií WHO. Program anatómie a biológie vývoja. Lekárska fakulta Čilská univerzita K dispozícii na adrese: pp.centramerica.com