Zdieľam:
Kinyoun farbenie základov a techník
Kinyoun farbenie Jedná sa o farbiacu techniku používanú na farbenie acidorezistentných baktérií a kyslých parazitov. Narodila sa z modifikácie sfarbenia Ziehl-Neelsen; Obidve techniky sú interpretované rovnakým spôsobom, ale líšia sa v dvoch prvkoch: pri príprave hlavného činidla av tom, že technika Kinyoun nepoužíva teplo.
Z tohto dôvodu je tiež známe ako studené farbenie za studena Ziehl-Neelsen alebo Kinyoun. Je indikovaný na farbenie Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium leprae, atypické mykobaktérie, Nocardias sp, Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium meleagridis, Cryptosporidium felis, Cryptosporidium muris a Cyclosporas cayetanensis.
Za zmienku stojí, že Nocardias touto technikou slabo zafarbuje, pretože je čiastočne kyselinovzdorný alkohol, takže pre tento žáner existuje modifikácia metodiky.
Na druhej strane bola technika chladu Kinyoun kombinovaná s technikou trichrómu upravenou Didierom na detekciu kokcídií (Cryptosporidium parvum a Isospora belli) a spór mikroporidií (Enterocytozoon bieneusi a Encefalitozoon intestinalis).
index
- 1 Nadácia
- 2 Technika
- 2.1 Materiály
- 2.2. Príprava fuchsinu z Kinyounu
- 2.3 Príprava kyseliny alkoholu
- 2.4 Príprava kontrastného farbiva metylénovej modrej farby
- 2.5 Technika farbenia Kinyoun
- 2.6 Špeciálna technika Kinyoun pre Nocardias
- 2.7 Kombinovaná technika fenolických a trichromických fuchsínov modifikovaných Didierom
- 2.8 Kontrola kvality
- 3 Technika Kinyoun v porovnaní s technikou Ziehl -Kotúč
- 4 Odkaz
nadácie
Hlavným farbiacim činidlom je karbol fuchsin alebo fuchsin fenicada, ktorý má schopnosť viazať sa na karbolové kyseliny, ktoré sú prítomné vo voskovitej bunkovej stene, bohaté na lipidy (mykolové kyseliny) mykobaktérií a určité parazity..
Toto spojenie nie je proti pôsobeniu odfarbenia kyselinou; preto sú mikroorganizmy definované ako alkohol odolný voči kyselinám.
Na rozdiel od techniky Ziehl-Neelsen - ktorá fixuje farbivo teplom - v technike Kinyoun tento krok nie je potrebný, pretože roztok fenolického fuchsínu pripravený pre túto techniku obsahuje vysokú koncentráciu fenolu..
Fenol rozpúšťa lipidový materiál bunkovej steny, čo umožňuje vstup farbiva karbol fuchsin. Po preniknutí farbiva zostáva farbivo fixované aj napriek premytiu alkoholovou kyselinou.
Takýmto spôsobom nadobúdajú mikroorganizmy odolné voči kyselinám charakteristickú červenú farbu, zatiaľ čo všetko, čo nie je alkohol odolný voči kyselinám, sa zmení na farbu a zafarbí na modro..
technika
materiály
- Modifikovaný fenolový fuchsín.
- alkohol octová.
- Metylénová modrá.
Príprava fynsinu z Kinyounu
- Základný fuchsin: 4 gr.
- Fenol: 8 ml.
- Alkohol (95%): 20 ml.
- Destilovaná voda: 100 ml.
Základný fuchsín v alkohole sa musí pomaly rozpúšťať a neustále miešať. Následne sa kryštalizovaný fenol roztaví vo vodnom kúpeli pri 56 ° C. Po rozpustení pridajte 8 ml do roztoku fuchsínu pripraveného vyššie.
Príprava alkoholovej kyseliny
- Koncentrovaná kyselina chlorovodíková: 3 ml.
- Etanol (95%): 97 ml.
Musí sa merať, spájať a miešať.
Príprava kontrastného farbiva metylénovej modrej farby
- Metylénová modrá: 0,3 g.
- Destilovaná voda: 100 ml.
Odváži sa a rozpustí.
Technika farbenia Kinyoun
1. Pripravte škvrnu priamo zo vzorky, ktorou môže byť okrem iného sputum, pľúcna tekutina, močový sediment, cerebrospinálna tekutina alebo výkaly; alebo zo suspenzie mikroorganizmov získaných z čistých kolónií vyvinutých v primárnom kultivačnom médiu.
2. Opravte škvrnu teplom.
3. Umiestnite škvrnu na farebný mostík a prikryte pripraveným fenolovým fuchsinovým činidlom Kinyoun. Nechajte ho sedieť 3 alebo 5 minút.
4- Umyte destilovanou vodou.
5- Bielenie kyselinou kyslým alkoholom počas 3 minút a opláchnite destilovanou vodou.
6 - Bielidlo opäť odfarbujte s kyslým alkoholom počas 1 alebo 2 minút, kým sa odtiahne viac farbiva.
7 - Umyte destilovanou vodou a nechajte kanalizáciu umiestniť do zvislej polohy.
8- Prípravok zakryte metylénovou modrou a nechajte pôsobiť 4 minúty.
9- Umyte destilovanou vodou a nechajte uschnúť.
10 až 40x a potom 100x.
Ak chcete zlepšiť a urýchliť farbenie mikroorganizmov s rýchlym uvoľňovaním kyselín, pridajte 1 kvapku zmáčadla (napr. Tergitol č. 7) do 30 alebo 40 ml fenolického fuchsínu Kinyoun..
Niektoré laboratóriá menia kontrastné farbivo metylénovej modrej farby na žiarivo zelenú alebo kyselinu pikrovú; prvá dáva zelenú farbu na pozadie a druhá vytvára žltú farbu.
Technika Kinyoun špeciálna pre Nocardias
Na zlepšenie farbenia baktérií Nocardia sa používa modifikácia farbenia Kinyoun. Táto technika je nasledovná:
1 - Pokrytie šmuhy s Kinyoun oplotený fuchsin po dobu 3 minút.
2 - Umyte destilovanou vodou.
3- krátko bielidlo s 3% pripraveným kyslým alkoholom, až kým nie je striekané viac farbiva.
4- Opláchnite destilovanou vodou.
5- Prípravok zakryte metylénovou modrou a nechajte pôsobiť 30 sekúnd.
6. Umyte destilovanou vodou a nechajte uschnúť.
Kombinovaná technika fenolických a trichromických fuchsínov modifikovaných Didierom
Táto technika sa odporúča na analýzu vzoriek stolice pri hľadaní kokcídií a spór Microsporidium sp súčasne Postup, ktorý sa má dodržiavať, je takýto: \ t
1 - Pokrytie šmyku fenolovým fuchsinom Kinyoun po dobu 10 minút.
2- Vyberte farbivo a premyte destilovanou vodou.
3 - Bielenie počas 30 sekúnd alkoholovou kyselinou chlorovodíkovou.
4- Opláchnite destilovanou vodou.
5- Pokryte náter roztokom trichrómu po dobu 30 minút pri teplote 37 ° C.
6 - Umyte destilovanou vodou.
7- Decolorize po dobu 10 sekúnd s kyselinou octovou.
8 Umyte náter po dobu 30 sekúnd pomocou 95% etanolu.
Kontrola kvality
Ako pozitívna kontrola sa pripravia šmuhy s kmeňmi kmeňa Mycobacterium tuberculosis a farbené pripravenými činidlami, aby sa overilo, či baktérie majú správnu farbu (červená-fuchsia).
Negatívne kontroly sa môžu tiež použiť pri príprave rozterov s akýmkoľvek kmeňom, ktorý nie je alkohol odolný voči kyselinám, čím sa overí, že celá vzorka má farbu kontrastu..
Technika Kinyoun v porovnaní s technikou Ziehl -Kotúč
Technika Kinyoun je jednoduchšia, pretože odstraňuje krok ohrevu, ale jej hlavnou výhodou je, že zabraňuje emisiám výparov, vysoko toxických a dlhodobo spôsobujúcich rakovinu. Preto je farbenie Kinyoun bezpečnejšie pre personál farbenia.
Je dôležité vziať do úvahy, že je potrebné dbať na to, aby reagenty neprišli do priameho styku s pokožkou, pretože sú žieravé a bielidlo je horľavé..
Čo sa týka nevýhod, negatívny náter nemusí nevyhnutne znamenať, že mikroorganizmus nie je prítomný. Okrem toho prítomnosť bunkového detritu môže spôsobiť falošne pozitívne výsledky, ktoré spôsobujú zmätok v diagnóze.
referencie
- Aplikovaná klinická chémia (2016). BK Kinyoun Kit K dispozícii na adrese: cromakit.es
- Orozco-Rico Miguel. Kinyounové farbivo a dve Coccidia v HIV. Medical Journal MD. 2011; 3 (2): 137
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A (2009). Mikrobiologická diagnostika Bailey & Scott. 12 ed. Argentína. Panamericana S.A Editorial.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. (5. vydanie). Argentina, Editorial Panamericana S.A..
- Prispievatelia Wikipédie. "Kinyounská škvrna." Wikipédia, Voľná encyklopédia. Wikipédia, Voľná encyklopédia, 8. február 2018. Web. 5. januára 2019.
- Combol A, Fernández N, Figueredo E, Acuña A, Zanetta E. Zavedenie farbiacej techniky na simultánnu diagnostiku Coccidia a Microsporidia. Inštitút hygieny Univerzity republiky. Montevideo. Uruguaj. K dispozícii na adrese: higiene.edu.uy