Nadácia Tetrathionate, príprava a použitie



tetračný bujón alebo bujón TT je selektívne kvapalné kultivačné médium na obohatenie a regeneráciu kmeňov Salmonella. Bola vytvorená spoločnosťou Müeller a neskôr upravená spoločnosťou Kauffmann, a preto ju nazývajú bujóny Müeller-Kauffmann.

Pôvodné médium obsahovalo proteózy peptony, uhličitan vápenatý a tiosíran sodný. Kauffmann pridal žlčové soli a vytvoril ďalšiu modalitu s jasnou zelenou farbou. Tieto látky inhibujú rast koliformných baktérií, pričom ponechávajú voľné médium pre vývoj patogénnych baktérií, v tomto prípade Salmonella.

Modifikácia bola veľmi úspešná, pretože významne zvýšila citlivosť média. Preto je v súčasnosti užitočná na vyhľadávanie Salmonellas v akomkoľvek type vzorky, ale najmä pre tuhé alebo kvapalné výkaly a potraviny..

Jeho príprava pozostáva z dvoch fáz; komerčné médium je bázou na prípravu tetrationátového bujónu a následne na vytvorenie tetrationátu, ktorý sa má vytvoriť, sa pridá jódovaný roztok jódu na dokončenie média..

Americká asociácia verejného zdravotníctva (APHA) odporúča použitie tethionátového bujónu doplneného jasnou zelenou farbou na obohatenie vzoriek pri hľadaní salmonely, pretože je selektívnejšia ako tetrationátová živná pôda a seleničitý bujón.

Všeobecne je tetrationátový bujón ideálny, ak sú baktérie rodu Salmonella podozrivé v malých množstvách alebo ktoré sú zneužívané vystavením účinkom inhibičných látok alebo priemyselnými procesmi, ktoré minimalizujú ich životaschopnosť..

index

  • 1 Nadácia
  • 2 Príprava
    • 2.1 - Tetrathionát
    • 2.2 -Varte tetrathionátový vývar s jasne zelenou farbou
  • 3 Použite
  • 4 Kontrola kvality
  • 5 Odporúčania
  • 6 Referencie

nadácie

Predkladané peptony zodpovedajú digestom kazeínového pankreasu a peptickému štiepeniu živočíšneho tkaniva. Tieto poskytujú všeobecne zdroj uhlíka, dusíka a živín pre rast baktérií.

Tiosíran sodný reaguje s jódovaným roztokom za vzniku tetrationátu. To inhibuje rast koliformných baktérií a podporuje rozvoj baktérií, ktoré obsahujú enzým tetrathionát reduktázu, medzi nimi je rod Salmonella, ale aj Proteus.

Žlčové soli tiež pôsobia ako inhibičná látka väčšiny grampozitívnych baktérií a niektorých gramnegatívnych baktérií (koliformných baktérií)..

Uhličitan vápenatý absorbuje toxické látky vznikajúce rozkladom tetrationátu, ktorý tvorí kyselinu sírovú. V tomto zmysle uhličitan vápenatý neutralizuje kyslosť udržiavajúc pH stabilného média.

V prípade jasne zelenej modality táto látka zvyšuje selektívnu silu tetrationátového bujónu inhibíciou iných mikroorganizmov iných ako rodu Salmonella..

príprava

-Tetrationátový bujón

Roztok jódového jódu

ľutovať:

  • 6 g jódu.
  • 5 g jodidu draselného.

Jodid draselný sa rozpustí v približne 5 ml sterilnej destilovanej vody, potom sa pomaly zahrieva jód a zmes sa zahrieva. Po úplnom rozpustení sa naplní sterilnou destilovanou vodou, až kým nedosiahne konečný objem 20 ml.

Polovica bázy pre tetrationátový bujón

Odváži sa 46 g dehydratovaného média a suspenduje sa v 1 litri sterilnej destilovanej vody. Zmes sa mieša a zahrieva až do úplného rozpustenia, môže sa variť iba niekoľko minút. Nesterilizujte v autokláve. Báza média sa nechá vychladnúť na asi 45 ° C a potom sa pridá 20 ml jódovaného roztoku..

Po pridaní roztoku iodurada do média sa má ihneď použiť. Ak nechcete použiť celú zmes, postupujte nasledovne:

10 ml základného média sa rozdelí do skúmaviek a pridá sa len 0,2 ml jódovaného roztoku k tým, ktoré sa majú naočkovať vzorkami..

Tie, ktoré sa nepoužijú, môžu byť stále uložené v chladničke, pretože médium nie je sterilizované, ideálne je pripraviť presné množstvo..

Farba média pred pridaním jódovaného roztoku jódu je mliečne biela s bielou zrazeninou a po pridaní je hnedá s hustou zrazeninou. Pozorovaná zrazenina je normálna a zodpovedá uhličitanu vápenatému, ktorý sa nerozpúšťa. Konečné pH média je 8,4 ± 0,2.

-Tetrathionate bujónový variant s jasne zelenou farbou

Na prípravu tetrationátového bujónu s jasne zelenou farbou sa uskutočnia všetky vyššie opísané kroky, ale okrem toho sa k zmesi pridá 10 ml svetlozeleného roztoku pripraveného v množstve 0,1%..

Jasne zelená

Tento roztok sa pripraví nasledujúcim spôsobom:

Navážte 0,1 g zelenej farby a suspendujte v 100 ml destilovanej vody. Zahrejte až do varu, aby sa dosiahlo úplné rozpustenie. Uložiť do jantárovej fľaše.

použitie

Pre vzorky stolice (kultúra stolice) je protokol nasledovný:

Naočkujte 1 g pevnej stolice alebo 1 ml tekutej stolice v skúmavke s 10 ml tetrationátového bujónu na priame použitie. Silne pretrepte a inkubujte v aerobióze pri 43 ° C počas 6-24 hodín.

Následne sa odoberie alikvotná časť 10 až 20 μl bujónu a subkultivuje sa v médiu selektívnom pre salmonelu, ako je napr. SS agar, XLD agar, svetlý zelený agar, Hektoenov enterický agar..

Súbežne by sa mali selektívne médiá na salmonelu naočkovať priamou vzorkou (výkaly) bez obohatenia. Pre vzorky rektálnych výterov stiahnite materiál odobratý v skúmavke a postupujte podľa vyššie uvedeného postupu.

Pre vzorky potravín vážte 10 g pevnej potravy alebo 10 ml tekutej potravy a naočkujte fľašu 100 ml hotového tetrationátového bujónu. Postupujte rovnako, ako je popísané vyššie, ale inkubujte pri 37 ° C.

Ako je možné vidieť, vzťah medzi vzorkou a bujónom bude vždy 1:10.

Kontrola kvality

Na testovanie kultivačného média sa môžu použiť známe kontrolné kmene. Najčastejšie sa používajú certifikované kmene ATCC.

Použité kmene sú Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella abony DSM 4224, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 a Staphylococcus aureus ATCC 25923.

V prípade kmeňov Salmonella sa očakáva vynikajúci vývoj, zatiaľ čo v prípade kmeňov Salmonella Escherichia coli môžu mať slabý alebo pravidelný vývoj a Gram pozitívne kmene (Enterococcus a Staphylococcus) sú čiastočne alebo úplne inhibované.

odporúčanie

-Pretože toto médium neinhibuje rast Proteus, niektoré laboratóriá používajú 40 mg / l novobiocínu na zabránenie vzniku tohto mikrobiálneho kmeňa. Antibiotikum by sa malo pridať pred jodizovaným roztokom jódu.

-Po príprave média vrátane jódovaného roztoku jódu by nemalo byť viac ako 2 hodiny po inokulácii.

-V okamihu distribúcie média do skúmaviek sa zmes musí kontinuálne homogenizovať, aby sa vytvorila zrazenina.

-V menej kontaminovaných vzorkách sa tetrationátový bujón inkubuje pri 35-37 ° C a vo vysoko kontaminovaných vzorkách sa odporúča inkubácia pri 43 ° C..

referencie

  1. Laboratórium Conda Pronadisa. 2010. Základ tetrathionátového bujónu podľa Müeller-Kauffmanna. K dispozícii v:
  2. BD Laboratories 2003. Tetrathionate Broth Base. K dispozícii v:
  3. Laboratories Britania. 2015. Tetionátový bujónový základ. K dispozícii v:
  4. Media BBL. 2005. Prípravky na pestovanie druhov Salmonella.
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologická diagnostika Bailey & Scott. 12 ed. Redakcia Panamericana S.A. Argentína.
  6. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Porovnanie medzi kultivačným médiom seleničitanu sodného a tetrationátu sodného, ​​obidvoch inkubovaných pri 37 ° C a 42 ° C. izolácia Salmonella spp nosných stolíc. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220