Zdieľam:
Sójový vývar tripticaseína nadácie, príprava a použitie
sójový vývar tripticaseína Je to kvapalné kultivačné médium, veľmi výživné a neselektívne. Vďaka svojej veľkej univerzálnosti je jedným z najpoužívanejších kvapalných kultivačných médií v mikrobiologickom laboratóriu.
Je tiež známy ako sójový bujón tripticasa sójový alebo trávený kazeín-sója, ktorej skratka je TSB pre jeho akronym v angličtine Som tryptický Broth alebo CST pre jeho akronym v španielčine. Jeho použitie je veľmi rôznorodé vďaka svojmu zloženiu. Skladá sa z tripteínu, sójového peptónu, chloridu sodného, fosforečnanu draselného a glukózy.
Je schopný reprodukovať klinicky významné patogénne baktérie, vrátane tých, ktoré sú nutrične náročné a anaeróbne baktérie. V tomto prostredí sa môžu vyvíjať aj niektoré oportúnne huby a kontaminanty.
Vzhľadom na svoju vysokú nutričnú silu má vysokú citlivosť na detekciu mikrobiálnej kontaminácie, z tohto dôvodu ho USDA Animal and Plant Health Inspection Service vybrala na mikrobiologickú analýzu vakcín..
Podobne, sójová polievka s triptikázou spĺňa požiadavky rôznych liekopisov (Európsky EP, japonský JP a severoamerický USP) pre mikrobiologické štúdie výrobkov na priemyselnej úrovni, ako sú kozmetika a potraviny..
Na druhej strane stojí za zmienku, že napriek svojmu veľkému využitiu je toto médium relatívne lacné, takže je cenovo dostupné pre väčšinu mikrobiologických laboratórií. Je tiež veľmi ľahké sa pripraviť.
index
- 1 Nadácia
- 2 Príprava
- 2.1 Sójová šťava tryptikamínu
- 2.2-Varianty triptikázového sójového bujónu
- 3 Použite
- 4 Nasadené
- 5 Kontrola kvality
- 6 Obmedzenia
- 7 Referencie
nadácie
Tripteína, peptón a glukóza mu poskytujú základné výživné vlastnosti, aby sa z neho stal ideálny prostriedok pre rýchly mikrobiálny vývoj..
Približne 6 až 8 hodín inkubácie už možno pozorovať rast vo väčšine mikroorganizmov. Avšak, tam sú pomaly rastúce kmene, ktoré môžu trvať niekoľko dní rast.
Chlorid sodný a fosforečnan draselný pôsobia ako osmotická rovnováha a regulátor pH. Prítomnosť rastu je dokázaná výskytom turbidity v médiu; ak nie je rast, médium zostáva priesvitné.
Vďaka svojej svetlej farbe je možné pozorovať produkciu pigmentov, ako je to znázornené na obrázku umiestnenom na začiatku výrobku, čo zodpovedá pigmentu produkovanému Pseudomonas aeruginosa.
príprava
-Tryptický sójový bujón
Na prípravu sójového bujónu s triptikázou sa naváži 30 g dehydratovaného komerčného média v digitálnom meradle. Potom sa rozpustí v litri destilovanej vody obsiahnutej vo fiole.
Zmes sa nechá stáť 5 minút a potom sa privedie do zdroja tepla, aby sa napomohlo rozpusteniu média. Počas varu by sa mal pravidelne trepať 1 minútu.
Po rozpustení sa podľa potreby distribuuje v skúmavkách s vhodnou veľkosťou. Môžu byť použité rúrky s bavlnenou zátkou alebo bakelitovými viečkami. Následne sa skúmavky sterilizujú médiom v autokláve pri 121 ° C počas 15 minút.
Hodnota pH média by mala byť 7,3 ± 0,2
Je potrebné vziať do úvahy, že farba dehydratovaného kultivačného média je béžová a mala by sa skladovať pri teplote 10 až 35 ° C na suchom mieste. Pripravený bujón je svetlý jantár a mal by byť skladovaný v chladničke (2 až 8 ° C)..
-Variácie triptikázového sójového bujónu
Sójový bujón modifikovaný tryptikamínom môže byť pripravený pridaním žlčových solí a novobiocínu, aby bol selektívny na izoláciu \ t E. coli. Ďalšou možnosťou pre ten istý účel je príprava sójového bujónu tripticase doplneného vankomycínom, cefixímom a teluritom (2,5 μg / ml)..
Na druhú stranu, viac glukózy (0,25%) možno pridať do tryptikázového sójového bujónu, keď cieľom je stimulovať tvorbu biofilmu.
použitie
Je dostatočne výživný, aby umožnil rast náročných alebo nepríjemných baktérií, ako napr Streptococcus pneumoniae, Streptococcus sp a Brucella sp, nie je potrebné dopĺňať krv alebo sérum.
Podobne sa v tejto pôde môžu vyvinúť niektoré huby, ako napr Komplex Candida albicans, Aspergillus sp a Histoplasma capsulatum.
Okrem toho je toto médium za anaeróbnych podmienok ideálne na izoláciu baktérií patriacich do rodu Clostridium, ako aj anaeróbnych nesporulovaných baktérií klinického významu..
Ak sa pridá 6,5% chloridu sodného, môže sa použiť na rast Enterococcus a ďalších Streptococcus skupiny D.
Na úrovni výskumu je veľmi užitočný v rôznych protokoloch, najmä v štúdiu baktérií, ktoré tvoria biofilmy alebo biofilmy. Používa sa tiež na prípravu bakteriálnej suspenzie pri 0,5% Mac Farlandu potrebnej na vykonanie antibiogramu metódou podľa Kirbyho a Bauera.
V tomto prípade sa odoberú 3 až 5 kolónií podobného vzhľadu a emulgujú sa v 4 až 5 ml sójového bujónu tryptikáza. Potom sa inkubuje 2 až 6 hodín pri 35 až 37 ° C a následne sa upraví na požadovanú koncentráciu použitím sterilného fyziologického roztoku. Sójové bujóny trypticase by sa nemali používať počas 18 až 24 hodín inkubácie.
zasadený
Vzorka sa môže vysiať priamo alebo subkultivovať čisté kolónie odobraté zo selektívneho média. Inokulum by malo byť malé, aby sa médium neinkubovalo pred inkubáciou.
Normálne sa inkubuje pri 37 ° C v aerobióze 24 hodín, ale tieto podmienky sa môžu líšiť v závislosti od požadovaného mikroorganizmu. Môže sa tiež inkubovať v anaeróbnych podmienkach pri 37 ° C niekoľko dní, ak je to potrebné. Napríklad pri náročných alebo pomaly rastúcich mikroorganizmoch možno inkubovať až 7 dní.
Pri mikrobiologickej analýze farmaceutických látok, ako sú vakcíny, sú protokoly prísnejšie. V týchto prípadoch sa živná pôda bez rastu neodloží, kým nedosiahne 14 dní nepretržitej inkubácie.
Kontrola kvality
Pre každú pripravenú dávku sa 1 alebo 2 skúmavky inkubujú bez inokulácie, aby sa preukázala sterilita. Musí zostať nezmenený.
Môžete tiež zasadiť známe kmene na vyhodnotenie ich správania. Medzi kmeňmi, ktoré sa môžu použiť, sú:
Aspergillus brasiliensis ATCC 1604, Candida albicans ATCC 10231, Bacillus subtilis ATCC 6633, Staphylococcus aureus ATCC 6538 alebo 25923, Escherichia coli ATCC 8739, Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 14028.
Vo všetkých prípadoch musí byť rast uspokojivý za podmienok atmosféry a teploty vhodných pre každý mikroorganizmus.
obmedzenia
-Fermentácia glukózy spôsobuje zníženie pH média produkciou kyselín. To môže byť nepriaznivé pre prežitie niektorých mikroorganizmov citlivých na kyslosť.
-Neodporúča sa na udržanie kmeňov, pretože okrem kyslosti baktérie po niekoľkých dňoch vyčerpávajú živiny s následnou akumuláciou toxických látok, ktoré spôsobujú, že životné prostredie je nehostinné..
-Starostlivosť sa musí venovať starostlivosti o všetky protokoly sterility, pretože bujóny sú ľahko kontaminované.
-Po príprave triptikázových sójových bujónov sa nepokúšajú preniesť vývar do inej sterilnej skúmavky, pretože tento typ manévrov je veľmi náchylný na kontamináciu..
referencie
- Podmienky pre dobrú štúdiu citlivosti agarovým difúznym testom. Rev. infectol. 2002; 19 (2): 77-81. K dispozícii na: scielo.org
- Britské laboratórium Tryteín sójový bujón. 2015. K dispozícii na adrese: britanialab.com
- Laboratórium MCD. Sójový vývar Trytica. K dispozícii na adrese: electronic-systems.com
- Neogénne laboratórium. Soy Broth Triptych. K dispozícii na adrese: foodsafety.neogen.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologická diagnostika Bailey & Scott. 12 ed. Redakcia Panamericana S.A. Argentína.
- Rojas T, Vásquez Y, Reyes D, Martínez C, Medina L. Vyhodnotenie techniky magnetickej imunoseparácie na regeneráciu Escherichia coli O157: H7 v mliečnych krémoch. ALAN. 2006; 56 (3): 257-264. K dispozícii na adrese: scielo.org.ve
- Gil M, Merchán K, Quevedo G, Sánchez A, Nicita G, Rojas T, Sánchez J, Finol M. Tvorba biofilmov v izolovaných Staphylococcus aureus podľa antimikrobiálnej citlivosti a klinického pôvodu. Vitae. 2015; 62 (1): 1-8. K dispozícii na: saber.ucv.ve
- Narváez-Bravo C, Carruyo-Núñez G, Moreno M, Rodas-González A, Hoet A, Wittum T. Izolácia Escherichia coli O157: H7 vo vzorkách stolice dvojitej hovädzieho dobytka z mesta Miranda, štátu Zulia, Venezuela. Cient. (Maracaibo), 2007; 17 (3): 239-245. K dispozícii na: scielo.org