Základ, príprava a použitie selenitového bujónu



selenitový bujón Je to selektívne kvapalné kultivačné médium. Bol navrhnutý Leifsonom na obohatenie vzoriek, kde je podozrenie na prítomnosť enteropatogénnych baktérií rodu Salmonella..

Toto médium spĺňa požiadavky Americkej asociácie verejného zdravotníctva (APHA), a preto je akceptované na skúmanie prítomnosti Salmonella vo vzorkách stolice, v moči, tekutých alebo tuhých potravinách, vo vode..

Chemické zloženie, ktoré má, uprednostňuje regeneráciu týchto mikroorganizmov a naopak bráni rastu iných. Je hlavne toxický pre väčšinu baktérií patriacich do čeľade Enterobacteriaceae. To však tiež umožňuje regeneráciu kmeňov Shigella a neinhibuje rast Pseudomonas a Proteus..

Skladá sa z bezvodého seleničitanu sodného, ​​bezvodého fosforečnanu sodného, ​​peptonov a laktózy. Existuje tiež variant, ku ktorému sa pridáva cystín, teda jeho názov selenit-cystínový bujón.

V súčasnosti je preferované použitie selenično-cystínového bujónu, pretože sa získa vyššie percento regenerácie salmonely, čo je ekvivalentné pozorovaniu s inými selektívnymi médiami s rovnakým účelom, ako je napríklad sodná soľ tetrathionátu..

index

  • 1 Nadácia
  • 2 Príprava
    • 2.1 - Selena
    • 2.2 - Príprava komerčného média
    • 2.3 Variantný selenično-cystínový bujón
  • 3 Použitie
  • 4 Nasadené
  • 5 Kontrola kvality
  • 6 Obmedzenia
  • 7 Referencie

nadácie

Peptóny obsiahnuté v živnej pôde slúžia ako živiny pre správny vývoj mikroorganizmov. Kmene Salmonella používajú ako zdroj dusíka, vitamínov a aminokyselín peptony.

Laktóza je fermentovateľný sacharid, zatiaľ čo seleničitan sodný je inhibičnou substanciou, ktorá spomaľuje rast grampozitívnych baktérií a väčšiny baktérií prítomných v črevnej flóre, najmä čeľade Enterobacteriaceae. Fosforečnan sodný je tlmivý roztok, ktorý stabilizuje pH média.

V prípade variantu seleničitého bujónu obsahujúceho L-cystín je táto ďalšia zlúčenina redukčným činidlom, ktoré minimalizuje toxicitu selenitu, čím sa zvyšuje výťažok salmonely..

príprava

-Selenitový bujón

Ak máte zložky zmesi, môžete zvážiť:

4 g bezvodého seleničitanu sodného.

10 g bezvodého fosforečnanu sodného.

5 g peptonov.

4 g laktózy.

Zlúčeniny sa rozpustia v 1 litri sterilnej destilovanej vody. Môže sa mierne zahrievať, aby sa rozpustil v celom rozsahu.

Niektoré laboratóriá vystavujú médium 10 minút v plynulej pare, aby sa sterilizovali, pretože autokláv by sa nemal používať. Ak je médium sterilizované, môže byť uchovávané v chladničke, kým sa nepoužije.

Môže sa tiež pripraviť bez sterilizácie a priamo 10 až 15 ml sa podáva do sterilných skúmaviek.

V tomto prípade by mal byť ponechaný na odpočinok a okamžite použitý. Keďže médium nie je sterilné, nemôže byť uchovávané v chladničke na neskoršie použitie.

-Príprava komerčného média

Ak je dostupné komerčné médium, odváži sa 23 g dehydratovaného média a rozpustí sa v jednom litri sterilnej destilovanej vody. Krátko zahrejte, aby sa rozpustil. Nesterilizujte v autokláve. Podávajte asepticky 10 alebo 15 ml v sterilných skúmavkách.

Konečné pH média by malo byť 7,0 ± 0,2.

Je potrebné poznamenať, že farba dehydrovaného média je béžová a prípravok je číry a priesvitný jantár.

Variantný selenično-cystínový bujón

Obsahuje rovnaké zlúčeniny selenitového bujónu, ale pridá sa 10 mg cystínu. Zvyšok postupu je presne rovnaký, ako je opísané vyššie.

aplikácie

Toto médium je špeciálne určené na použitie v epidemiologických štúdiách v prípadoch, keď ochorenie nie je v akútnom štádiu, asymptomatickí pacienti alebo zdraví nosiči..

Izolácia rodu Salmonella je zvyčajne obtiažna, pretože sa zvyčajne zistí, že kontaminuje vzorky vzácnym spôsobom. Byť v malých množstvách sa ľahko prekrýva s rastom iných rodov baktérií, ktoré sa nachádzajú vo väčšom množstve.

Na druhej strane, surovina, s ktorou sa spracované potraviny spracúvajú, je často vystavená pôsobeniu tepla, dehydratačným procesom, použitiu dezinfekčných prostriedkov, radiačných a konzervačných látok..

Salmonely prítomné v surovine sú preto nesprávne spracované predložením produktu vyššie uvedeným priemyselným procesom. Podobne, v prípade klinických vzoriek, ako sú výkaly, kmene môžu byť slabé, ak pochádzajú od pacientov, ktorí boli liečení antibiotikami..

Preto akákoľvek vzorka, v ktorej je podozrenie na prítomnosť Salmonella, musí byť vopred obohatená v laktózovom bujóne a potom obohatená v seleničitom bujóne, aby sa optimalizovala jeho regenerácia v selektívnych médiách, ako je napríklad SS agar, xylózový agar, lyzín deoxycholát (XLD). ), okrem iného enterický Hektoen agar (HE) a zeleno-svetlý agar.

zasadený

Pre vzorky stolice odoberte 1 g vzorky a suspendujte v skúmavke s 10 až 15 ml seleničitej pôdy. Ak je stolica tekutá, vezmite 1 ml a suspendujte vo vývare. Na rektálne výtery vylejte tampónový materiál do vývaru.

Vo vzorkách tuhých potravín odoberte 1 g a suspendujte v seleničitom bujóne.

V tekutých potravinách zmiešajte v rovnakých dieloch so seleničitým vývarom pri dvojnásobnej koncentrácii.

Pre vzorky moču odstreďte, supernatant zlikvidujte, odoberte všetok sediment a suspendujte v seleničitej pôde.

Bujóny sa inkubujú pri 37 ° C počas 24 hodín inkubácie. Bakteriálny rast je doložený turbiditou. Na inkubáciu pri 42 ° C sa môže pridať aj ďalšia skúmavka na vzorku. Následne sa zo selenitového bujónu vysejú selektívne pevné médiá.

Kontrola kvality

Na kontrolu sterility sa seleničitý bujón z každej dávky bez inokulácie inkubuje 24 hodín pri 37 ° C. Očakáva sa, že nedochádza k zakaleniu alebo zmene farby média.

Na kontrolu dobrého fungovania média sa môžu použiť známe kmene, ako napríklad:

Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028,  Salmonella choleraesuis ATCC 12011, Escherichia coli ATCC 25922 a Proteus mirabilis ATCC 43071.

Očakávané výsledky sú:

  • Pre prvé tri bakteriálne kmene musí byť rast uspokojivý.
  • na Escherichia coli čiastočná inhibícia.
  • Pre Proteus mierny rast.

obmedzenia

Stredný seleničitý bujón je toxický pre ľudskú pokožku, preto je potrebné sa vyhnúť priamemu kontaktu.

referencie

  1. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Porovnanie medzi kultivačným médiom seleničitanu sodného a tetrationátu sodného, ​​obidvoch inkubovaných pri 37 ° C a 42 ° C. izolácia Salmonella stolica stolíc nosičov. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220
  2. Laboratories Britania. Selenito Caldo. 2015. K dispozícii na adrese: britanialab.com
  3. Neogen Laboratories Selenito vývar K dispozícii na adrese: foodsafety.neogen.com
  4. González -Pedraza J, Pereira-Sanandres N, Soto-Valela Z, Hernández-Agirre E, Villarreal-Camacho J. Mikrobiologická izolácia Salmonella spp. a molekulárne nástroje na jeho detekciu. Zdravie, Barranquilla 2014; 30 (1): 73-94. K dispozícii na adrese: http://www.scielo.org.
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologická diagnostika Bailey & Scott. 12 ed. Redakcia Panamericana S.A. Argentína.