EC základ, príprava a použitie

EC bujón alebo vývar Escherichia coli Je to selektívne kvapalné kultivačné médium. Toto médium sa odporúča štandardnými metódami na počítanie koliformných a fekálnych koliformných baktérií technikou najpravdepodobnejšieho počtu (NMP) vo vzorkách vody a potravín, kde hlavným činidlom je Escherichia coli.

EC bujón sa skladá z tripteínu, laktózy, solí žlčových kyselín, fosforečnanu draselného, ​​fosforečnanu draselného, ​​chloridu sodného a vody. Jeho receptúra ​​je strategicky navrhnutá tak, aby podporovala rast totálnych a fekálnych koliformných baktérií a zabránila rozvoju ďalších sprievodných mikroorganizmov.

Baktéria Escherichia coli je hlavnou fekálnou koliformou prítomnou ako kontaminant vo vode a potravinách, čo spôsobuje dôležité gastrointestinálne poruchy.

Je potrebné poznamenať, že existuje mnoho sérotypov Escherchia coli; medzi nimi môžeme spomenúť enterohemoragickú (EHEC), enteroinvazívnu (EIEC), enteropatogénnu (EPEC), enterotoxigénnu (ETEC) a entero-agregačnú (EAEC).

Tento prostriedok má schopnosť umožniť rozvoj všetkých z nich, ale bez možnosti rozlišovať medzi nimi. Na tento účel sa musia vykonať dodatočné skúšky.

Mikrobiologické štúdium vody a potravy najpravdepodobnejším číslom (NMP) na vyhľadávanie totálnych a fekálnych koliformných baktérií je protokol, ktorý je v súlade s niekoľkými fázami; presumptívna fáza, potvrdzujúca fáza a fáza ukončenia. EC médium sa použije v potvrdzujúcej fáze.

index

• 1 Nadácia
  • 1,1 EC bujónu
  • 1.2 EC bujón modifikovaný novobiocínom
• 2 Príprava
  • 2.1 EC bujón
  • 2.2 EC bujón modifikovaný novobiocínom
• 3 Použite
  • 3.1 Analýza totálnych a fekálnych koliformných baktérií
• 4 Kontrola kvality
• 5 Odporúčania
• 6 Referencie

nadácie

EC Broth

Médium EC je založené na poskytovaní potrebných nutričných prvkov pre optimálny vývoj totálnych a fekálnych koliformných baktérií, do ktorých je baktéria zahrnutá. Escherichia coli.

Tieto výživové prvky sú poskytované tripteínom, ktorý je vynikajúcim zdrojom peptidov a aminokyselín. Okrem toho obsahuje aj laktózu, fermentovateľný sacharid, ktorý poskytuje energiu a umožňuje ukázať, či baktérie produkujú plyn.

Na druhej strane médium obsahuje žlčové soli, ktoré poskytujú selektívny charakter, pretože inhibuje rast grampozitívnych mikroorganizmov, ktoré môžu byť prítomné vo vzorke..

Podobne fosforečnan draselný a fosforečnan draselný pôsobia ako systém na vyrovnávanie pH. Tento systém je nevyhnutný, pretože laktóza obsiahnutá v živnej pôde má tendenciu acidifikovať médium, keď je fermentovaná mikroorganizmami, ale toto je kompenzované fosfátovými soľami..

Preto sú tieto prvky nevyhnutné, pretože nekontrolovaná kyslosť môže ovplyvniť správny vývoj požadovaných mikroorganizmov.

Chlorid sodný stabilizuje médium osmoticky, zatiaľ čo voda je rozpúšťadlom prítomných rozpúšťadiel a poskytuje kvapalnú konzistenciu médiu..

EC bujón modifikovaný novobiocínom

Okrend a Rose vytvorili rôzne EC bujóny, nazývané EC bujón modifikovaný novobiocínom. Modifikácia spočívala v znížení koncentrácie žlčových solí a pridaní 20 mg / dl novobiocínu.

Táto modifikácia podporuje obnovenie kmeňov Escherichia coli enterohemoragický (O157: H7).

Tento bakteriálny sérotyp spôsobuje závažnú hemoragickú kolitídu, ktorá môže spôsobiť hemolytický uremický syndróm (HUS); čo môže spôsobiť akútne zlyhanie obličiek s vysokou úmrtnosťou, ktorá môže dosiahnuť až 50% u starších ľudí.

Kvôli chorobnosti a úmrtnosti spôsobenej každoročne touto baktériou v dôsledku konzumácie kontaminovaných potravín, Ministerstvo poľnohospodárstva Spojených štátov amerických (USDA) vo veľkej miere odporúča použitie tohto prostriedku..

príprava

EC Broth

Navážte 37,4 g dehydratovaného média a rozpustite v 1 litri destilovanej vody. Zmes by mala zostať 5 minút. Následne sa v zdroji tepla často rozpúšťa.

Akonáhle je rozpustený, je distribuovaný v skúmavkách, ktoré boli predtým upravené s Durhamovou trubicou vnútri. Sterilizujte v autokláve pri 121 ° C počas 15 minút.

Hodnota pH média by mala byť 6,9 ± 0,2. Farba dehydrovaného média je béžová a pripravená je svetlá jantárová.

Vína sa skladujú v chladničke, kým sa nepoužijú. V čase použitia musia byť bujóny pri izbovej teplote.

Na druhej strane, EC živná pôda môže byť tiež pripravená v dvojnásobnej koncentrácii.

EC bujón modifikovaný novobiocínom

Navážte 36,7 g dehydratovaného média a rozpustite v 1 litri vody. Zvyšok prípravku je rovnaký ako zvyšok opísaný vyššie.

použitie

Analýza totálnych a fekálnych koliformných baktérií

EC bujón je ideálny pre potvrdzujúcu fázu štúdie koliformných baktérií metódou NMP, a to ako vo vzorkách vody, tak aj vo farmaceutických výrobkoch a potravinách..

Lazy zakalené a produkované plynom získané v presumptívnej fáze by mali byť resedované v 2% svetle zelenej žlči a vývare EC.

Pre celkové koliformné baktérie sa bujóny EC inkubujú v aerobióze počas 24 až 48 hodín pri 37 ° C a pre fekálne koliformy sa inkubujú v aerobióze počas 24 až 48 hodín pri 44 ° C..

V oboch prípadoch sa interpretuje nasledujúcim spôsobom: zakalené rúry s výrobou plynu sa považujú za pozitívne. Ak v priebehu 24 hodín nedochádza k produkcii plynu, inkubácia pokračuje až 48 hodín.

EC pozitívne bujóny prechádzajú do kompletnej konfirmačnej fázy, ktorá spočíva v reseedovaní v selektívnom médiu, ako je napríklad Mac Conkey agar, EMB agar alebo Endo agar..

Ak je použitá živná pôda EC modifikovaná novobiocínom, odporúča sa, aby sa pozitívne skúmavky resuspendovali na agare Mac Conkey so sorbitolom..

Kontrola kvality

Kontrola kvality sa musí vykonávať na každej šarži pripraveného média. Najprv sa musí vyhodnotiť sterilita média. V tomto zmysle sa jedna alebo dve bujóny inkubujú bez inokulácie v aerobióze počas 24 hodín pri 37 ° C. Očakávaným výsledkom je transparentný bujón, bez zákalu alebo zmeny farby.

Po druhé by sa mal vyhodnotiť rast známych kmeňov, pre ktoré sa môžu použiť nasledujúce baktérie: Escherichia coli, ATCC 8739, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

Vo všetkých prípadoch sa očakáva uspokojivý mikrobiálny vývoj, pričom sa pozoruje zakalený bujón s produkciou plynu E. coli a bez plynu pre salmonelu.

Ďalšie kmene, ktoré môžu byť zahrnuté do kontroly sú: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212. Tieto kmene musia byť úplne inhibované.

odporúčanie

-Umiestnenie skúmaviek Durham je nevyhnutné pre štúdium koliformných baktérií.

-Pred sterilizáciou rozdeľte médium do skúmaviek, nikdy potom.

-Nepoužívajte, ak má médium viac ako 3 mesiace prípravy.

-Nepoužívajte, ak dôjde k zmene obvyklých vlastností média.

referencie

1. Laboratories Britania. EC Médium. 2015. K dispozícii na adrese: britanialab.com
2. E. coli enterohemorrhagic. Centrum pre potravinovú bezpečnosť a verejné zdravie. 2010. K dispozícii na adrese: cfsph.iastate.edu
3. Neogen Corporation. Médium EC. K dispozícii na adrese: foodsafety.neogen.com
4. Neogen. Médium EC modifikované novobiocínom. K dispozícii na adrese: foodsafety.neogen.com
5. Jure M, Condorí S, Leotta G, Chinen I, Miliwebsky E, Allori C, Aulet O, Castillo M. Detekcia, izolácia a charakterizácia Escherichia coli výrobca Shiga toxínu z čerstvého mletého hovädzieho mäsa z mäsiarstva v Concepción, provincia Tucumán. Rev Microgol podľa Arg; 2010, 42 (4): 284-287. Dostupné na: www.scielo.org.