Nadácia laktosado vývar, príprava a použitie



laktózový bujón je kvapalné neselektívne kultivačné médium, ktoré sa používa hlavne ako médium na predbežné obohacovanie pri izolácii kmeňov Salmonella z mikrobiologickej analýzy spracovaných potravín, mliečnych výrobkov alebo vody. Odporúča to Medzinárodná komisia pre mikrobiologické špecifikácie potravín (ICMPF).

Médium obsahuje enzymatické štiepenie želatíny, mäsového extraktu a laktózy, látok potrebných na rast baktérií. Okrem toho je laktóza fermentovateľným uhľohydrátom, takže niektoré koliformy sú schopné ju rozdeliť produkciou plynu.

Z tohto dôvodu je laktózový bujón odporúčaný Americkou asociáciou verejného zdravotníctva (APHA) na presumptívne štúdium totálnych a fekálnych koliformných baktérií, čo ho považuje za vynikajúcu alternatívu nahradenia laurylsulfátového triptozového bujónu štandardnou technikou najpravdepodobnejšieho počtu (NMP). ), ktorý sa používa na mikrobiologickú analýzu vzoriek potravinárskych, mliečnych a povrchových vôd, podzemného, ​​rekreačného, ​​domáceho a priemyselného odpadu.

index

  • 1 Nadácia
  • 2 Príprava
  • 3 Použitie
    • 3.1 Predbežné obohatenie
    • 3.2 Analýza totálnych a fekálnych koliformných baktérií
  • 4 Kontrola kvality média
  • 5 Referencie

nadácie

Pre mikrobiologickú analýzu niektorých vzoriek je nevyhnutný krok predbežného obohatenia, aby bolo možné obnoviť špecifický mikroorganizmus, ktorý môže byť vo veľmi malom množstve alebo za nepriaznivých podmienok, ktoré porušujú alebo minimalizujú jeho životaschopnosť..

Taký je prípad suchých a spracovaných potravín, prípadne kontaminovaných Salmonellas sp. V týchto prípadoch, ak sú prítomné baktérie, počas výrobného procesu výrobku utrpeli fyzikálne a chemické zlé zaobchádzanie..

Takým spôsobom, že mikroorganizmy sú vystavené nepriaznivým faktorom, ako je dehydratácia, vystavenie účinkom inhibičných alebo toxických produktov, a prekrývaniu, ktoré je spôsobené okrem iného prítomnosťou iných baktérií vo väčšom množstve..

V tomto zmysle má laktózový bujón opravný účinok na poškodené štruktúry mikroorganizmu, čo spôsobuje jeho zotavenie a rozmnožovanie takým spôsobom, že ho možno detegovať..

Podobne, laktózový bujón má schopnosť riediť inhibičné látky, ktoré môžu ovplyvniť jeho životaschopnosť, čo umožňuje jeho vývoj. Okrem toho je nutričné ​​zloženie laktózového bujónu strategicky výhodné na podporu rastu Salmonella sp nad inými mikroorganizmami.

Na konečnú identifikáciu sa musí vykonať subkultivácia na iné konečné plodiny.

Na druhej strane, zloženie média tiež umožňuje detekciu mikroorganizmov fermentujúcich laktózu, ktoré produkujú plyn.

príprava

Na prípravu jedného litra laktózového bujónu sa odváži 13 g dehydratovaného média a rozpustí sa v 1000 ml destilovanej vody..

Ak chcete pomôcť rozpustiť médium vo vode, môžete roztok trochu zahriať, ale nie príliš..

Po homogénnom roztoku sa roztok pripraví nasledujúcim spôsobom: ak sa živná pôda použije na vyhľadávanie koliformných baktérií, pripraví sa stojan so skúmavkami a vloží sa do neho Durhamova fermentačná trubica..

Durhamova trubica je veľmi dôležitý detail, pretože umožní detekciu tvorby plynu, cenných údajov pri hľadaní koliformných baktérií..

Keď sú skúmavky pripravené, do nich sa dávkuje 10 ml laktózového bujónu, ktorý musí byť dostatočný na pokrytie celej Durhamovej trubice..

Ak sa laktózový bujón použije ako pred obohatený bujón, nie je nutné umiestniť Durhamovu fermentačnú trubicu. V tomto prípade sa vyžaduje väčšie množstvo média (225 ml), ktoré sa podáva v 500 ml fľašiach, širokých ústach a tepelne odolným skrutkovým uzáverom..

Následne sa skúmavky alebo banky prenesú do autoklávu pri 121 ° C na 15 minút.

Médium by malo zostať pri konečnom pH 6,9 ± 0,2 pri 25 ° C.

Vína sa skladujú v chladničke, kým sa nepoužijú.

Pred použitím sa musia bujóny temperovať pri izbovej teplote.

Na druhej strane, laktózový bujón môže byť tiež pripravený v dvojnásobnej koncentrácii.

Niektoré laboratóriá pridali brómkrezolovú purpurovú do laktózového bujónu ako indikátor pH, aby sa zobrazili skúmavky, kde došlo ku fermentácii laktózy zmenou farby. V tomto prípade má vývar fialovú farbu a ak sa fermentácia zmení na žltú.

aplikácie

V mikrobiologických laboratóriách sa laktózový bujón široko používa ako relatívne lacné médium, ktoré ponúka spoľahlivé a rýchle výsledky (24-48 hodín)..

Môže sa použiť na analýzu totálnych a fekálnych koliformných baktérií vo vode a potravinách alebo ako pred obohatený bujón pre salmonelu..

Preenrichment

Predbežné obohatenie je krokom pred obohatením vzorky, čo výrazne zlepšuje regeneráciu baktérií rodu Salmonella v spracovaných potravinách..

Na tento účel sa vzorka tuhej potravy (25 g) alebo kvapaliny (25 ml) naočkuje do 225 ml laktózového bujónu a inkubuje sa 24 až 48 hodín. Následne sa v obohatenom médiu subkultivuje selenitový cystínový bujón alebo tetrationátový bujón. Potom prechádza do selektívnych médií XLD a SS.

Analýza totálnych a fekálnych koliformných baktérií

Je to vynikajúci prostriedok ako indikátor fekálnej kontaminácie.

Preto je laktózový bujón ideálny pre predpokladanú fázu koliformnej štúdie metódou Most Probable Number.

U vzoriek, u ktorých existuje podozrenie na veľké množstvo koliformných baktérií, sa naočkuje menšie množstvo koliformných baktérií (1 ml), zatiaľ čo u vzoriek, u ktorých je podozrenie na menšie množstvo koliformných baktérií, sa naočkuje väčší objem vzoriek (10 ml)..

Na analýzu sa pripraví 10 riedení-1, 10-2, 10-3, pre každú použitú koncentráciu sa vytvorí batéria s 3-5 rúrkami.

Z každého riedenia sa rovnaký objem zaseje na laktózové bujóny.

Skúmavky sa inkubujú 24 hodín. Bujóny, ktoré sú negatívne, sa inkubujú ďalších 24 hodín.

Interpretácia výsledkov sa uskutočňuje pozorovaním dvoch charakteristík: prvou je prítomnosť alebo neprítomnosť zákalu a keďže toto médium neobsahuje indikátor pH, nedôjde k zmene farby.

Druhou je výroba plynu alebo nie. Plyn je ľahko demonštrovaný v Durhamovej trubici tým, že sa vo vnútri objavuje jedna alebo viac bublín vzduchu.

Považuje sa za pozitívne, ak sú pozorované obidve charakteristiky, tj turbidita pri výrobe plynu. Pozitívne skúmavky by sa mali znovu naočkovať do potvrdzujúceho média (bujónová bujónová zelená 2% žlč a bujón EC).

Kontrola kvality média

- Pri príprave média je dôležité, aby ste zabudli umiestniť skúmavky Durhams, ak je ich účelom štúdium koliformných baktérií..

- Médium pred sterilizáciou neprehrievajte.

- Pred sterilizáciou rozdeľte do skúmaviek, nikdy potom.

- Nepoužívajte, ak má médium viac ako 3 mesiace prípravy.

- Nepoužívajte, ak spozorujete akúkoľvek zmenu v obvyklých vlastnostiach média.

- Pri príprave dávky laktózového bujónu otestujte jeho kvalitu výsadbou kmeňov známych ako Escherichia coli, Enterobacter aerogenes , Citrobacter freundii a Klebsiella pneumoniae. Rastú veľmi dobre, s produkciou plynu (pozitívna kontrola).

- To môže tiež zahŕňať Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium alebo Enterococcus faecalis, ktoré rastú dobre, ale bez produkcie plynu (negatívna kontrola).

- Je potrebné poznamenať, že pôvodná farba dehydratovaného média je béžová a stredná farba pripravená veľmi číra a transparentná žltá. Ak dôjde k zmene farby alebo vzhľadu, môže dôjsť k ich poškodeniu.

referencie

  1. Acevedo R, Severiche C, Castillo M. Biológia a environmentálna mikrobiológia. (2013) 1. vydanie. Univerzita Cartagenas, Kolumbia.
  2. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B a Velázquez O. (2009). Techniky mikrobiologickej analýzy potravín. 2. vydanie. Fakulta chemická, UNAM. Mexiko.
  3. Laboratóriá Conda Pronadisa. 2017. Dvojitá koncentrácia laktózového bujónu (European Pharm.)
  4. Fernández-Rendón C, Barrera-Escorcia G. Porovnanie techník extrakcie koliformných baktérií z jazerného sedimentu Xochimilco, Mexiko. Rev. Microbiol.  2013; 45 (3): 180-184. K dispozícii na: scielo.org.
  5. Sotomayor F, Villagra V, Cristaldo G, Silva L, Ibáñez L. Stanovenie mikrobiologickej kvality vôd artézskych studní v okresoch okresov Centrálna, Kordillerská a hlavná obec. Invest. Cienc. zdravie 2013; 11 (1): 5-14. K dispozícii od: scielo.iics.