Zdieľam:
Vogel-Johnson Agar základ, príprava a použitie
Vogel-Johnson agar je tuhé, selektívne a diferenčné kultivačné médium špeciálne pripravené na izoláciu. \ t Staphylococcus aureus. Toto médium vytvoril Vogel a Johnson v roku 1960 z modifikácie agarového teluritového agaru formulovaného v roku 1955 Zebovitzom, Evansom a Nivenom..
Modifikácia spočívala vo zvýšení koncentrácie manitolu prítomného v médiu a pri zabudovaní indikátora pH. Súčasný vzorec sa skladá z tripteínu, kvasnicového extraktu, manitolu, fosforečnanu draselného, chloridu lítneho, glycínu, fenolovej červenej, agaru, 1% roztoku teluritu draselného a vody..
Treba poznamenať, že existujú aj iné prostriedky, ktoré sú, podobne ako agar Vogel-Johnson, selektívne na izoláciu S. aureus, ako je solený manitol agar a agar Baird Parker. V tomto zmysle možno povedať, že základom agaru Vogel-Johnson je zmes slaného manitolového agaru a agaru Baird Parker..
V prvých kolóniách S. aureus Vyznačujú sa fermentáciou manitolu a zmenou pH indikátora na žltú. Na druhej strane, v druhom S. aureus je charakterizovaný redukciou teluritu na telúr a tvorbou šedej až čiernej kolónie. Obidve vlastnosti sú pozorované na agare Vogel-Johnson.
Toto médium, podobne ako jeho náprotivky, je užitočné na detekciu Staphylococcus aureus vo vzorkách potravín, hygienických kontrolách priemyselných výrobkov av klinických vzorkách.
index
- 1 Nadácia
- 1.1 Príspevok živín
- 1.2 Selektívny výkon
- 1.3 Diferenciálny výkon
- 1.4 Osmotická rovnováha a tuhnutie
- 2 Príprava
- 2,1 1% hmotn./obj. Roztok teluritu draselného
- 2.2 Vagel-Johnson agarové základné médium
- 3 Použite
- 4 Kontrola kvality
- 5 Referencie
nadácie
Príspevok živín
Médium Vogel-Johnson obsahuje tripteín a kvasinkový extrakt; obe látky poskytujú aminokyseliny s dlhým reťazcom, ktoré slúžia ako zdroje uhlíka a dusíka potrebné na rast baktérií. Baktérie, ktoré sú schopné rásť v tomto médiu, odoberú živiny z týchto látok.
Selektívny výkon
Agar Vogel-Johnson je schopný inhibovať rast gramnegatívnych baktérií a dokonca aj niektorých grampozitívnych baktérií, čo podporuje rozvoj koagulázovo pozitívnych stafylokokov. Inhibičnými látkami sú telurit draselný, chlorid lítny a glycín.
Diferenciálny výkon
Látky, ktoré robia toto diferenciálne médium sú manitol a telurit draselný. Manitol je sacharid, a keď je fermentovaný, vznikajú kyseliny, ktoré menia médium z červenej na žltú, čo sa deje vďaka prítomnosti fenolového červeného pH indikátora..
Kým, bezfarebný telurit, keď je redukovaný na telurid bez kovu, má tmavosivú až čiernu farbu.
Staphylococcus aureus ferituje manitol a znižuje telurit na telúr. Preto typické kolónie S. aureus v tomto médiu sú sivé alebo čierne obklopené žltým médiom.
Baktérie, ktoré rastú v tomto médiu a neznižujú telurit alebo fermentujú manitol, budú tvoriť transparentné kolónie obklopené červeným médiom, ešte intenzívnejšie ako pôvodná farba, v dôsledku alkalizácie média použitím peptonov..
Na druhej strane baktérie, ktoré redukujú telurit, ale nefermentujú manitol, budú rásť ako sivé alebo čierne kolónie obklopené tmavočervenou farbou..
Ak sa médium pripravilo bez pridania teluritu draselného, kolónie S. aureus vyvíjali by sa ako žlté kolónie, obklopené žltým médiom, ako je napríklad agar so slaným manitolom.
Osmotická rovnováha a tuhnutie
Fosforečnan draselný udržuje osmotickú rovnováhu média a upravuje pH na neutralitu 7.2. Zatiaľ čo agar poskytuje kultivačnému médiu pevnú konzistenciu.
príprava
1% roztok teluritu draselného w / v
Tento roztok nie je obsiahnutý v dehydratovanom médiu, pretože nemôže byť sterilizovaný v autokláve. Z tohto dôvodu sa pripravuje oddelene a pridá sa do sterilizovaného média.
Niektoré komerčné domy predávajú hotový 1% roztok teluritu draselného. Ak sa chcete pripraviť v laboratóriu, postupujte nasledovne:
Navážte 1,0 g teluritu draselného a zmerajte 100 ml destilovanej vody. Rozpustite telurit draselný v časti vody a potom doplňte množstvo vody, kým nedosiahnete 100 ml. Roztok sa sterilizuje filtračnou metódou.
Médium Vogel-Johnson agarovej bázy
Navážte 60 g dehydratovaného média a rozpustite v 1 litri destilovanej vody. Zmes sa zahrieva k varu, aby sa napomohlo úplnému rozpusteniu. Počas procesu rozpúšťania sa médium často mieša.
Sterilizujte v autokláve pri tlaku 15 libier a teplote 121 ° C počas 15 minút. Vyberte z autoklávu a nechajte stáť, kým médium nedosiahne teplotu približne 45 až 50 ° C. Pridajte 20 ml predtým pripraveného roztoku teluritu draselného na 1%..
Premiešajte a nalejte do sterilných Petriho misiek. Nechajte stuhnúť a usporiadať invertované v plaquers pre neskoršie skladovanie v chladničke až do použitia.
Konečné pH pripraveného média by malo byť 7,2 ± 0,2.
Pred vysadením vzorky počkajte, kým sa doska nezmení na okolitú teplotu.
Farba pripraveného média je červená.
použitie
Hoci môže byť použitý na izoláciu S. aureus vo všetkých typoch vzoriek sa väčšinou používa na mikrobiologickú analýzu farmaceutických výrobkov, kozmetiky a potravín.
Odporúča sa, aby inokulum bolo husté. Očkovanie sa môže uskutočňovať stríciou platinovou rukoväťou alebo povrchom stierkou Drigalski.
Platne sa inkubujú pri teplote 35 až 37 ° C počas 24 až 48 hodín v aerobióze.
Kontrola kvality
Na kontrolu kvality média Vogel-Johnson je možné použiť nasledujúce kontrolné kmene:
Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 alebo Proteus mirabilis ATCC 43071.
Očakávaný výsledok je nasledovný: pre kmene S. aureus Uspokojivý rast s čiernymi kolóniami obklopenými žltým médiom. na S. epidermidis pravidelný rast s priesvitnými alebo čiernymi kolóniami obklopenými červeným médiom.
Podobne pre E. coli očakáva sa, že dôjde k úplnej inhibícii a pre Proteus mirabilis čiastočná alebo úplná inhibícia; ak rastie, bude to robiť striedmo a kolónie budú čierne obklopené stredne červenou farbou.
referencie
- BD Laboratories. VJ (Vogel a Johnson Agar). 2006. K dispozícii na adrese: bd.com
- Laboratories Britania. Vogel-Johnson Agar. 2015. K dispozícii na adrese: britanialab.com
- Laboratories Britania. Telurit draselný. 2015. K dispozícii na adrese: britania.com
- Laboratórium Himedia. Agar Médium Vogel-Johnson. 2018. K dispozícii na: himedialabs.com/TD/MU023.pdf
- Vogel- Johnson Agar Base. Mikrobiologický manuál spoločnosti Merck. 12. vydanie, str. 502-503. Dostupné v: Users / Team / Downloads
- Prispievatelia Wikipédie, "Ágar Vogel Jonhson", Wikipédia na encyklopédiu livre, disponível em: wikipedia.org.
- Venezuelský štandard Covenin 1292-89. (1989). Food. Izolácia a počítanie Staphylococcus aureus. K dispozícii v:sencamer.gob.ve