Jasne zelený agarový základ, príprava a použitie



svetlý zelený agar je to pevné kultivačné médium s vysokým stupňom selektivity. Používa sa výlučne na izoláciu kmeňov rodu Salmonella, existujú však niektoré výnimky, ako napríklad druhy typhi a paratyphi, ktoré v tomto médiu nerastú..

Hľadanie rodu Salmonella je časté vo vzorkách výkalov, vody alebo potravy. V tomto zmysle môže byť toto médium veľmi užitočné. Tento agar bol vytvorený v roku 1925 Kristensen, Lester a Jurgens, neskôr upravený Kauffmannom.

Skladá sa z pluripeptonov z peptického štiepenia živočíšneho tkaniva a pankreatického štiepenia kazeínu, tiež obsahuje kvasinkový extrakt, chlorid sodný, laktózu, sacharózu, fenolovú červenú, svetle zelenú a agar-agar.

Vyznačuje sa tým, že je pre väčšinu baktérií veľmi nehostinným médiom, čo podporuje rast salmonely, avšak niektoré koliformné baktérie v ňom môžu existovať, pričom sa vyvíjajú slabo..

Je dôležité zdôrazniť, že v tomto médiu nerastie rod Shigella a ani Salmonella typhimurium, alebo Salmonella paratyphi. Preto, ak je žiaduce izolovať tieto mikroorganizmy, mali by sa použiť iné prostriedky, ako napríklad XLD agar..

index

  • 1 Nadácia
    • 1.1 Svetle zelený agar
    • 1.2 Varianty jasne zeleného agaru (BGA)
  • 2 Príprava
  • 3 Použitie / aplikácie
  • 4 Kontrola kvality
  • 5 Referencie

nadácie

Jasne zelený agar

Každá zo zložiek, ktoré tvoria médium, má špecifickú funkciu, ktorá určuje vlastnosti a vlastnosti agaru.

Pluripeptony a extrakt z kvasiniek sú zdrojom živín, z ktorých mikroorganizmy odoberajú dusík a minerály potrebné na ich vývoj. Laktóza a sacharóza sú zdrojmi energie pre mikroorganizmy, ktoré sú schopné ich fermentovať.

Svetle zelená je inhibičná látka, ktorá zabraňuje vzniku grampozitívnych baktérií a veľkému počtu gramnegatívnych mikroorganizmov..

Chlorid sodný poskytuje osmotickú stabilitu médiu. Zatiaľ čo fenolová červeň je indikátorom pH, mení farbu pri detekcii produkcie kyselín z fermentácie sacharidov.

Nefermentujúce kolónie laktózy a sacharózy rastú v tomto médiu bielej farby, ružovej alebo transparentnej, na červenom pozadí. Napríklad baktérie rodu Salmonella.

Zatiaľ čo baktérie na fermentáciu laktózy alebo sacharóza, ktoré sú schopné rásť v tomto médiu, vyvíjajú na žlto-zelenom pozadí zelenožlté alebo zelenožlté kolónie. Napríklad, Escherichia coli a Klebsiella pneumoniae.

Varianty jasne zeleného agaru (BGA)

Existujú aj iné varianty jasne zeleného agaru; novobiocín zelený agar s jasnou glukózou (NBG) a novobiocínový agar s jasnou zelenou glycerolovou laktózou (NBGL).

Novobiocín agar jasne zelenej glukózy (NBG)

Obsahuje sójový agar trypticase, citrát železitý amónny, pentahydrát tiosíranu sodného, ​​fenolovú červenú, glukózu, jasne zelenú, novobiocín a destilovanú vodu..

Slúži na izoláciu kolónií Salmonella zo vzoriek stolice.

V tomto prípade sú jasne zelené a novobiocín inhibujúce látky, ktoré zabraňujú rastu grampozitívnych baktérií a niektorých gramnegatívnych mikroorganizmov..

Tiosíran sodný je zdrojom síry a citran železitý je zdrojom železa, ktoré sú potrebné na odhalenie tvorby sírovodíka tvorbou čiernej zrazeniny síranu železitého..

Glukóza je fermentovateľný sacharid a fenolová červeň je indikátor pH.

V tomto médiu sa kolónie Salmonella vyvíjajú veľké s čiernym centrom obklopeným načervenalým halo a nasledujúcou jasnou viditeľnou oblasťou. Niektoré kmene Citrobacter freundii produkujú kolónie identické so salmonelou.

Jasne zelený novobiocín agar glycerol laktóza (NBGL)

Toto médium obsahuje sójový agar tryptikázy, citrát železitý amónny, tiosíran sodný, laktózu, glycerol, jasne zelenú, novobiocín a destilovanú vodu..

Rozdiel tohto média s predchádzajúcim médiom je, že glukóza je nahradená laktózou a glycerol a fenolová červeň sa nepoužíva.

Médium sa tiež používa na izoláciu druhov Salmonella, kolónie sa vyvíjajú čiernou produkciou sírovodíka.

Len kolónie, ktoré neprodukujú kyselinu z glycerolu alebo laktózy, dosahujú produkciu H2Je to dosť, pretože nízke pH interferuje s tvorbou H2Výsledkom sú bezfarebné kolónie pre väčšinu druhov Proteus a Citrobacter.

príprava

-Odváži sa 58 g komerčne získaného dehydratovaného média. Pridá sa v litri dvakrát destilovanej vody. Premiešajte, nechajte niekoľko minút odstáť a pripravte prípravok na zdroj tepla, kým sa úplne nerozpustí.

-Autoklávujte pri 121 ° C počas 15 minút, neprekračujte dobu sterilizácie.

-Nechajte stáť a podávajte aj horúce v sterilných Petriho miskách. Konečné pH by malo byť 6,9 ± 0,2.

-Nechajte tuhnúť a uchovávajte v chladničke až do použitia. Pred výsadbou by mali platne trvať izbovú teplotu.

-Práškové médium je zelené a pripravené na oranžovo-hnedú alebo červeno-zelenú farbu v závislosti od pH a komerčného domu. Veľmi hnedá farba indikuje, že agar bol prehriaty.

-Akonáhle je agar stuhnutý, neodporúča sa jeho prepracovanie, pretože sa médium zhoršuje.

Použitie / aplikácie

Toto médium sa okrem iného používa na vyhľadávanie kmeňov rodu Salmonella zo vzoriek stolice a mliečnych výrobkov..

Keďže ide o skôr nehostinné prostredie, odporúča sa zasadiť hojné inokulum, ak sa použije priama vzorka. V opačnom prípade by sa pred výsadbou na tomto médiu malo vykonať predbežné obohatenie a obohatenie vzoriek.

Keďže niektoré kmene Salmonella sú inhibované alebo rastú s ťažkosťami, odporúča sa sprevádzať toto médium inými selektívnymi agarmi pre salmonelu..

Všetky kolónie s charakteristickou salmonelou sa musia podrobiť biochemickým testom na definitívnu identifikáciu.

Kontrola kvality

Na testovanie dobrého fungovania jasne zeleného agarového média sa môžu použiť kmene ATCC na pozorovanie vývoja toho istého na ňom..

Najčastejšie používané kmene na kontrolu kvality sú: Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Escherichia coli ATCC 25922,  Shigella flexneri ATCC 12022, Staphylococcus aureus ATCC 6538.

Prvé 3 musia dať ružové alebo transparentné biele kolónie na červenom pozadí. Salmonella s dobrým vývojom a Proteus s riedkym alebo pravidelným rastom.

Klebsiella a Escherichia sa očakávajú nažltožlté kolónie so žltým pozadím av prípade Shigella a Staphylococcus by mali byť inhibované.

Dehydratované médium by sa malo skladovať pri izbovej teplote na suchom mieste, pretože médium je veľmi hygroskopické.

referencie

  1. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratórium S.A. Brilantný zelený agar. 2009
  2. Britské laboratórium Jasne zelený agar. 2015.
  3. Laboratórium BD. BD Brilliant Green Agar. 2013.
  4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. (5. vydanie). Argentina, Editorial Panamericana S.A..
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Mikrobiologická diagnostika Bailey & Scott. 12 ed. Argentína. Panamericana S.A Editorial