Nadácia, príprava a použitie Agar TSI



TSI alebo železný trojitý cukrový agar je pevné kultivačné médium, ktoré slúži ako biochemický test na usmernenie počiatočnej identifikácie gramnegatívnych bacilov. Je založený na preukázaní fermentácie prítomných cukrov a výroby sírovodíka a plynu.

Jeho zloženie a základ je veľmi podobný Kliglerovmu testu železa, s tým rozdielom, že obsahuje len glukózu a laktózu. Namiesto toho, ako už názov napovedá, trojité železné železo obsahuje tri fermentovateľné sacharidy: glukózu, laktózu a sacharózu..

Okrem toho, TSI médium má štyri proteínové deriváty, ktoré z neho robia veľmi výživný agar: kvasničný extrakt, mäsový extrakt, peptón a proteózový peptón. Obsahuje tiež síran železnatý, tiosíran sodný, chlorid sodný, fenolovú červeň a agar.

Neschopnosť mikroorganizmu fermentovať glukózu prítomnú v médiu ju okamžite vylučuje z rodiny Enterobacteriaceae. Preto je tento test nevyhnutný na rozhodnutie, ktorý spôsob identifikácie by mal byť použitý na určenie rodu a druhu.

Každé laboratórium rozhoduje, či pracuje s agarom TSI alebo agarovým agarom Kligler.

index

  • 1 Nadácia
    • 1.1 Chlorid sodný a agar
    • 1.2 Indikátor pH (fenolová červeň)
    • 1.3 Proteínové deriváty (kvasinkový extrakt, mäsový extrakt, peptón a peptid proteózy) \ t
    • 1.4 Fermentácia sacharidov (glukóza, laktóza a sacharóza)
    • 1.5 Výroba plynu
    • 1.6 Tiosíran sodný a síran železnatý (výroba sírovodíka) \ t
  • 2 Príprava
  • 3 Použitie
  • 4 Nasadené
  • 5 Obmedzenia
  • 6 Referencie

nadácie

Každá zo zlúčenín plní funkciu v médiu.

Chlorid sodný a agar

Chlorid sodný je nevyhnutný na udržanie osmotickej rovnováhy média. Kým agar poskytuje pevnú konzistenciu.

Indikátor PH (fenolová červeň)

PH pripraveného média sa vyrovná na 7,3 a pH indikátor (fenolová červeň) sa zmení na žltú hodnotu pod 6,8. To znamená, že malé množstvá kyseliny produkovanej fermentáciou cukrov zmenia médium z červenooranžovej na žltú.

Ak nedôjde k kvaseniu, dôjde k alkalizácii média použitím peptonov, pričom sa zmení z červenooranžovej na silnú červenú..

Proteínové deriváty (kvasinkový extrakt, mäsový extrakt, peptón a proteózový peptón) \ t

Keď baktérie metabolizujú proteíny prítomné v agare TSI, vyrábajú sa amíny, ktoré alkalizujú médium (hlavne na úrovni skosenia), pretože reakcia potrebuje kyslík. Amíny otáčajú rámček na červenú.

Ale to bude závisieť od schopnosti baktérií fermentovať sacharidy alebo nie.

Fermentácia sacharidov (glukóza, laktóza a sacharóza)

Štúdium fermentácie cukrov môže poskytnúť niekoľko obrázkov a každá z nich je interpretovaná odlišne. Interpretácia testu rozdeľuje mikroorganizmy do troch kategórií: neglukózové fermentory, nelaktózové fermentory a fermentory laktózy / sacharózy.

Je potrebné poznamenať, že množstvo glukózy v médiu je obmedzené, zatiaľ čo koncentrácia laktózy a sacharózy je 10-krát vyššia.

Baktérie čeľade Enterobacteriaceae a iné mikroorganizmy fermentujúce glukózu začnú tento cukor kvasiť, pretože je to najjednoduchší sacharid pre energiu..

Na druhej strane, laktóza a sacharóza sú komplexné sacharidy, ktoré sa musia rozložiť a premeniť na glukózu, aby mohli vstúpiť do Embden-Meyerhofovho cyklu..

-Nefermentujúce mikroorganizmy glukózy

Keď inokulovaný mikroorganizmus nie je schopný fermentovať glukózu, oveľa menej môže fermentovať iné sacharidy. Preto sa tu nevytvárajú kyseliny, ale v šikmoch vzniká tvorba amínov v dôsledku použitia peptonov.

V tomto prípade sa skosenie zmení na silnejšiu červenú a spodná časť trubice môže zostať nezmenená alebo môže byť tiež alkalizovaná, pričom zanechá celú červenú trubicu.

Interpretácia: K / K znamená alkalické skosenie / alkalické alebo neutrálne pozadie

Na obrázku, ktorý je na začiatku článku, vidíme obraz trubice D.

Tento výsledok ukazuje, že mikroorganizmus nepatrí do čeľade Enterobacteriaceae.

-Nefermentujúce mikroorganizmy laktózy / sacharózy

Ak sú baktérie schopné fermentovať glukózu, ale nie laktózu alebo sacharózu, stane sa nasledovné:

Baktéria spotrebuje všetku glukózu prítomnú po približne 6 až 8 hodinách, pričom je schopná okysliť skosenie aj taco; to znamená, že agar bude mať úplne žltú farbu. Keď je však glukóza vyčerpaná a neschopnosť používať laktózu a sacharózu, baktérie začnú metabolizmus proteínov.

Táto reakcia vyžaduje kyslík, preto dochádza k degradácii peptonov na povrchu (skosenie). Amíny vytvorili alkalizáciu rámu zmenou žltej na červenú. Táto reakcia je preukázaná pri 18 až 24 hodinách inkubácie.

Interpretácia: K / A znamená alkalické skosenie a kyslé taco.

Na obrázku, ktorý je na začiatku článku, vidíme obraz trubice B.

-Mikroorganizmy fermentujúce laktózu / sacharózu

Je zrejmé, že mikroorganizmy schopné fermentovať laktózu a sacharózu môžu fermentovať glukózu. Po vyčerpaní minimálneho množstva glukózy v médiu sa začne tvoriť pyruvát, ktorý sa bude tvoriť prostredníctvom aeróbneho cyklu Krebsovho cyklu a v období od 8 do 12 hodín bude všetko médium žlté..

Ak sú baktérie schopné štiepiť laktózu alebo sacharózu, kyseliny sa budú naďalej vyrábať a po 18 až 24 hodinách zostane celá skúmavka - zobák a taco - žltá..

Treba poznamenať, že použitie glukózy sa vykonáva dvoma spôsobmi: jedna v aeróbnej forme v skosení trubice a druhá anaeróbne v spodnej časti skúmavky.

Interpretácia: A / A znamená kyslé dno. Môže predstavovať plyn alebo nie.

Na obrázku, ktorý je na začiatku článku, vidíme obraz trubice A.

Výroba plynu

Niektoré mikroorganizmy sú schopné produkovať plyn počas fermentácie cukrov. Plyn je dokazovaný v trubici tlakom, ktorý pôsobí v agare. Tlak spôsobuje tvorbu bublín alebo posunutie agaru. Niekedy sa môže tvoriť plyn.

Je dôležité, aby v čase naočkovania média TSI bolo prepichnutie uskutočnené čisto od stredu agaru, až kým nedosiahne dno. Ak je prepichnutie odklonené smerom k stenám trubice, môže spôsobiť falošne pozitívne výsledky pri výrobe plynu, pretože uniká cez nesprávne vytvorený kanál..

Produkcia plynu, ako aj reakcie, ktoré sa vyskytujú v šikmých agaroch, potrebujú kyslík, preto sa odporúča, aby bola trubica pokrytá bavlnenou zátkou, a ak sa použije bakelitové veko, nesmie sa úplne nastaviť.

Produkcia plynu sa uvádza ako kladná (+) alebo záporná (-).

Tiosíran sodný a síran železnatý amónny (výroba sírovodíka)

Baktérie schopné produkovať sírovodík (bezfarebný plyn) odoberajú síru tiosíranu sodného prítomného v médiu. Akonáhle sa vytvorí H2S reaguje so síranom železnatým, pričom vzniká sulfid železa (jasne viditeľná čierna zrazenina)..

Výroba H2S sa uvádza ako kladné (+) alebo negatívne (-).

Na obrázku, ktorý je na začiatku článku, je vidieť obraz trubice C.

príprava

Odváži sa 62,5 g dehydratovaného trojitého cukru (TSI) agaru a rozpustí sa v jednom litri destilovanej vody.

Zahrievajte, kým sa agar úplne nerozpustí. Často sa varí za stáleho miešania. Rozdeľte 4 ml média v 13/100 skúmavkách s bavlneným viečkom.

Sterilizujte v autokláve pri 121 ° C počas 15 minút. Vyberte z autoklávu a nechajte ho nakloniť šikmo. Treba dbať na to, aby základňa aj rám mali rovnakú vzdialenosť.

Uchovávajte v chladničke pri teplote 2-8 ° C. Pred vysadením bakteriálneho kmeňa sa nechá temperovať.

Farba dehydrovaného média je svetlo béžová a pripravené médium je červenooranžové

Konečné pH pripraveného média je 7,3 ± 0,2.

aplikácie

Test TSI sa široko používa na úrovni mikrobiologického laboratória. Tento test je nevyhnutný na usmernenie typu testu, ktorý sa musí použiť na zistenie rodu a druhu. Jeho dobrá realizácia a interpretácia môžu ušetriť materiál a prácu.

Ak je výsledkom TSI K / K a test cytochróm oxidázy je pozitívny, je známe, že testy by sa mali používať na identifikáciu nefermentujúcich gramnegatívnych bacilov, ako sú Pseudomonas, Alcaligen, Achromobacter, Burkholderia, okrem iných rodov. Ak je to negatívna oxidáza, je orientovaná na rody Acinetobacter, Stenotrophomonas atď..

Na druhej strane, ak sa získa TSI A / A alebo K / A a test cytochróm oxidázy je negatívny, tým viac nitrátov sa redukuje na dusitany, budeme mať istotu, že ide o mikroorganizmus patriaci do čeľade Enterobacteriaceae. Identifikačná cesta bude v tomto prípade orientovaná na špecifické testy pre túto skupinu baktérií.

Na druhej strane, ak sa získa obraz K / A alebo A / A a test cytochróm oxidázy je pozitívny, ďalšie testy, ktoré sa majú namontovať, budú zamerané na identifikáciu fermentačných kmeňov, ktoré nepatria do čeľade Enterobacteriaceae, ako napríklad: Aeromonas, Plesiomonas, Vibrio a Pasteurella.

V TSI so sírovodíkom, negatívnou oxidázou sa bude riadiť identifikácia týchto rodov čeľade Enterobacteriaceae: Proteus, Citrobacter, Edwardsiella, Leminorella, Pragia, Trabusiella alebo Salmonella.

TSI s nedostatkom alebo miernym sírovodíkom v alkalickom skosení s alkalickým dnom a pozitívnou oxidázou bude viesť k použitiu testov na identifikáciu gramnegatívnych, nefermentujúcich bacíl produkujúcich H2S, ako napr Shewanella putrefaciens.

Nakoniec, TSI možno použiť na vyšetrovanie výroby sírovodíka v grampozitívnych baciloch, najmä ak je podozrenie, Erysipelothrix rhusiopathiae.

zasadený

Médium TSI musí byť naočkované čistými kolóniami, izolovanými v primárnych alebo selektívnych kultúrach. Ak sa kolónia odoberie zo selektívneho média, ktoré bolo naočkované vzorkami so zmiešanou flórou, je potrebné dbať na to, aby sa zobrala iba plocha, pretože v dolnej časti kolónie môžu byť v tomto médiu inhibované životaschopné kmene..

Preto by sa slučka nikdy nemala chladiť v selektívnom médiu, aby sa potom odobrala kolónia a naočkovala sa médium TSI.

Výsadba bude vykonaná pomocou rovnej slučky alebo ihly. Urobí sa prepichnutie, pričom sa musí dbať na to, aby prechádzalo stredom stredu, až kým nedosiahne dno, a potom sa výsadba dokončí očkovaním povrchu kľukatým spôsobom. Nerobte dva defekty.

Inkubujte pri teplote 37 ° C v aerobióze počas 18-24 hodín. Interpretovať v tomto čase, ani pred ani po.

obmedzenia

Skúška TSI by sa mala odčítať medzi 18 až 24 hodinami inkubácie. Čítanie pred týmto časom môže dať falošne pozitívny výsledok fermentácie A / A. Zatiaľ čo čítanie po tomto čase môže viesť k falošne negatívnemu obrazu nefermentora v dôsledku spotreby peptonov, ktoré alkalizujú médium.

referencie

  1. Mac Faddin J. (2003). Biochemické testy na identifikáciu klinicky významných baktérií. 3. vydanie. Redakčná Panamericana. Buenos Aires Argentína.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologická diagnostika Bailey & Scott. 12 ed. Redakcia Panamericana S.A. Argentína.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. 5. vydanie. Redakcia Panamericana S.A. Argentína.
  4. "TSI agar". Wikipédia, slobodná encyklopédia. 10. júl 2018, 08:09 UTC. 10. február 2019, 03:33 K dispozícii na adrese: en.wikipedia.org
  5. Laboratories Britania. TSI Agar (agar s trojitým cukrom). 2015. K dispozícii na adrese: britanialab.com
  6. BD Laboratories Trojitý agar s železným železom (TSI Agar). 2003. Dostupné na: bd.com