Nadácia, príprava a použitie Agar Thayer Martin



Thayer Martin agar Je to vysoko výživné a selektívne pevné médium na izoláciu Neisseria meningitidis a Neisseria gonorrhoeae; známe ako patogénne alebo klinicky významné Neisseria.

Jedným z najdôležitejších zvláštností agaru Thayer Martin je jeho vysoký obsah výživových doplnkov. Táto vlastnosť je nevyhnutná, pretože Neisserias sú veľmi náročné mikroorganizmy z hľadiska výživy a preto nerastú v bežných médiách.

Na druhej strane, pretože tieto mikroorganizmy sa normálne nachádzajú v nesterilných oblastiach, je nevyhnutné pridanie inhibítorov, ktoré bránia rastu sprievodnej flóry, bez toho, aby to malo vplyv na vývoj rodu Neisseria..

Tento agar je zložený z agaru GC bázy, hemoglobínu, doplnkových výživových doplnkov a komplexu inhibičných látok (antibiotík a fungicídov). Komerčné domy predávajú každý z doplnkov samostatne.

Vzorka, ktorá má byť zasadená v tomto médiu, bude závisieť od hľadaného mikroorganizmu. na Neisseria gonorrhoeae Ideálne vzorky sú vaginálne a uretrálne sekréty. Kým pre Neisseria meningitidis najpoužívanejšími sú exsudáty CSF, hltanu a nosohltanu.

index

  • 1 Nadácia
    • 1,1 GC bázový agar
    • 1.2 Hemoglobín
    • 1.3 Dodatok k obohateniu
    • 1.4 Inhibítory
  • 2 Príprava
    • 2.1 Pôvodný Thayer Martin Agar
    • 2.2 Agar Thayer Martin upravil
  • 3 Použite
  • 4 Kontrola kvality
  • 5 Obmedzenia
  • 6 Referencie

nadácie

Neisserias sú mikroorganizmy klasifikované ako nepríjemné, a preto je ich izolácia ťažká. Z tohto dôvodu je Thayer Martín komplexným médiom a každá z jeho zložiek plní funkciu, ktorá je vysvetlená nižšie:

Agar s jadrom GC

GC agar obsahuje proteózový peptid, kukuričný škrob, chlorid sodný, fosforečnan draselný, fosforečnan draselný a agar-agar. Jeho zložky poskytujú základné živiny pre mikrobiálny vývoj, neutralizujú toxické mastné kyseliny, prispievajú k udržaniu osmotickej rovnováhy, definujú pH a poskytujú pevnú konzistenciu pre životné prostredie..

hemoglobín

Hemoglobín poskytuje faktory V a X (nikotínamid adenín dinukleotid NAD a hemín). Preto v tomto prostredí rastú aj druhy Haemophilus. Hemoglobín sa môže získať komerčne v dehydratovanej forme alebo sa do média môže pridať čerstvá defibrinovaná hovädzia krv.

Dodatok k obohateniu

Na druhej strane sa do média Thayer-Martin musí pridať doplnok obohatenia, pretože živiny obsiahnuté v základnom agare nie sú postačujúce pre potreby rodu Neisseria..

Najčastejšie používaný doplnok obohatenia sa nazýva isovitalex. Obsahuje glutamín, adenín, NAD, karboxylázu, guanín, dusičnan železitý, kyselinu p-aminobenzoovú, vitamín B12, tiamín a glukózu. Všetky tieto zlúčeniny sú nevyhnutné pre správny vývoj patogénnych Neisseria.

inhibítory

Pretože ide o vysoko výživné médium, inhibítory sa musia používať na zabránenie rastu mikroorganizmov obvyklej flóry oblasti, a tým podporujú izoláciu rodu Neisseria..

Komplex inhibítorov sa skladá z vankomycínu, kolistínu a nystatínu. Vankomycín inhibuje rast grampozitívnych baktérií, kolistín zabraňuje vzniku gramnegatívnych baktérií, ako sú Pseudomonas a niektoré saprofytické Neisseria, a nystatín pôsobí na kvasinky ako Candida albicans.

Potom bol Thayer Martin agar modifikovaný; zmeny spočívali v pridaní trimetoprimu, zvýšení množstva agaru a pridaní extra glukózy. Tieto zmeny výrazne zlepšili regeneráciu druhov Neisseria gonorrhoeae.

Treba poznamenať, že trimethoprim inhibuje rast rodu Proteus a jeho následnú tvorbu rojenia. V tomto zmysle antibiotiká poskytujú selektívny charakter médiu Thayer Martin.

príprava

Agar pôvodného Thayera Martina

-GC Agar

Navážte 8,2 g dehydratovaného GC média a suspendujte v 100 ml. Premiešajte a varte 1 minútu s častým miešaním, aby sa rozpustil v celom rozsahu. Zmes sa sterilizuje v autokláve pri 121 ° C počas 15 minút.

-2% hemoglobínu

2 g dehydratovaného hemoglobínu sa suspendujú v 2 alebo 3 ml horúcej destilovanej vody za vzniku homogénnej zmesi. Pridá sa trochu viac vody, aby sa dosiahol objem 100 ml. Suspenzia musí byť pred sterilizáciou homogénna.

Sterilizujte v autokláve 15 minút.

-Dodatok k obohateniu

Rekonštituujte obchodnú cestu riedidlom dodaným v tom istom obchodnom dome. Dobre premiešajte. Množstvo riedidla, ktoré sa má použiť, bude špecifikované v inštrukciách kitu..

-Inhibičný doplnok V.C.N (vankomycín, kolistín, nystatín)

Injekčnú liekovku rekonštituujte riedidlom dodaným v komerčnom dome. Dobre premiešajte. Množstvo riedidla, ktoré sa má použiť, bude špecifikované v inštrukciách kitu..

-pripravený

Pre každých 100 ml GC agaru postupujte nasledovne: \ t

Keď GC agar opustí autokláv, nechá sa vychladnúť na teplotu približne 50 ° C a pridajú sa 2 ml pripraveného roztoku hemoglobínu, 2 ml doplnku na obohatenie (izobitalex alebo britalex) a 2 ml doplnku inhibície. Zmiešajte a podávajte v sterilných Petriho miskách.

Nechajte tuhnúť a uchovávajte v chladničke až do použitia.

Farba pripraveného média je čerešňovo červená. Konečné pH média je 7,2 ± 0,2

Modifikovaný Thayer Martin Agar

Navážte 8,2 g dehydratovaného GC média a suspendujte v 100 ml. Pridajte 1 g agaru a pridajte 0,3 g glukózy. Premiešajte a varte 1 minútu s častým miešaním, aby sa rozpustil v celom rozsahu. Zmes sa sterilizuje v autokláve pri 121 ° C počas 15 minút.

Pripravte hemoglobín a doplnok obohatenia, ako je opísané vyššie.

Použitým doplnkom inhibície je V.C.N.T (vankomycín, kolistín, nystatín, trimetoprim).

-pripravený

Postupujte podľa popisu pre pôvodný agar Thayer Martin.

použitie

Pred zasiatím vzoriek by mal byť agar Thayer Martin temperovaný. Bežne používanými vzorkami sú faryngeálne exsudáty, nazálne exsudáty, vaginálne, uretrálne a / alebo rektálne sekrécie a CSF..

Použite čerstvo odobraté vzorky a na agare urobte silnú inokulu. Vzorky sa vysejú priamo materiálom a potom sa na povrchu prúžkujú.

Doštičky sa inkubujú pri teplote 35 až 37 ° C počas 24 až 48 hodín v mikroaerofilnej nádobe (5% CO.)2). Na konci inkubačnej doby sa platne skúmajú na malé, sivé a niekedy mukoidné kolónie..

Vykonajte Gram a potvrdzujúce biochemické testy na podozrivých kolóniách.

Kontrola kvality

Na uskutočnenie kontroly kvality agaru Thayer Martin sa môžu použiť nasledujúce mikrobiálne kmene.

Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 a Neisseria meningitidis ATCC 13090; u oboch kmeňov sa očakáva uspokojivý vývoj.

Mali by sa zahrnúť aj tieto kmene: \ t Staphylococcus epidermidis ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 a Candida albicans ATCC 10231. Vo všetkých z nich sa očakáva úplné alebo čiastočné inhibovanie tohto média.

obmedzenia

-Treba mať na pamäti, že baktérie, ktoré sú rezistentné voči použitým inhibítorom, môžu rásť v médiu..

-Existujú kmene Neisseria gonorrhoeae ktoré môžu byť citlivé na koncentráciu použitého vankomycínu. Z tohto dôvodu sa odporúča použiť paralelne čokoládový agar doplnený isovitalexom, ale bez inhibítorov.

-Existujú kmene kvasiniek rezistentných na nystatín, ktoré môžu rásť v tomto médiu a interferovať s izoláciou patogénnych Neisseria, najmä gonokokov..

referencie

  1. Valtek diagnostické laboratóriá. Agar Thayer-Martin.2016. K dispozícii v: com
  2. Laboratories Britania. Thayer Martin modifikované médium. 2010. K dispozícii na adrese: britanialab.com
  3. Prispievatelia Wikipédie. Thayer-Martin agar. Wikipédia, Voľná ​​encyklopédia. 26. október 2017, 16:33 UTC. K dispozícii na adrese: wikipedia.org4. Prístup k 28. februáru 2019.
  4. Laboratories Britania. GC agar. 2010. K dispozícii na adrese: britanialab.com.
  5. Laboratories BBL ™ Medium Enrichment pre rýchle mikroorganizmy. 1999. K dispozícii v: bd.com
  6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologická diagnostika Bailey & Scott. 12 ed. Redakcia Panamericana S.A. Argentína.