Základ, príprava a použitie Agar TCBS



TCBS agar je vysoko selektívne a diferencované pevné kultivačné médium, ktoré sa používa najmä na izoláciu a kultiváciu baktérií Vibrio Vibrio cholerae, V. vulnificus a V. parahaemolyticus ako hlavné patogény tohto rodu.

Skratka TCBS znamená tiosulfát citrátovú žlčovú sacharózu. Tento agar je tiež známy ako selektívne médium pre Vibrios. Pôvodný vzorec vytvoril Nakanishi a neskôr ho upravil Kobayashi.

Skladá sa z kvasnicového extraktu, mäsového peptónu, tripteínu, citrátu sodného, ​​tiosíranu sodného, ​​žlčového oxanu, sacharózy, chloridu sodného, ​​citrátu železitého, modrej brómtymolu, modrej tymolu a agaru.

Toto zloženie umožňuje adekvátny vývoj druhov Vibrio z vody, výkalov a vzoriek potravín; okrem Vibrio hollisae, ktorý v tomto médiu nerastie. Okrem toho je médium TCBS schopné inhibovať rast ďalších sprievodných baktérií, najmä koliformných baktérií.

Vzhľadom na závažné gastrointestinálne a mimotelové problémy, ktoré niektoré druhy rodu Vibrio produkujú, je ich diagnóza veľmi dôležitá. Človek je infikovaný hlavne konzumáciou surového alebo nedovareného morského jedla alebo kontaminovanej vody, ale aj infekciou rán.

Z tohto dôvodu by klinické laboratóriá mali zahrnúť agar TCBS do štúdie kultúr stolice tekutých vzoriek stolice, najmä s výskytom ryžovej vody. Najmä vtedy, ak pacient uvádza, že bol v kontakte s morskou vodou alebo požíval morské plody alebo ryby.

index

  • 1 Nadácia
  • 2 Príprava
  • 3 Použite
  • 4 Nasadené
  • 5 Obmedzenie
  • 6 Kontrola kvality
  • 7 Referencie

nadácie

Výživový zdroj tohto média je kvasničný extrakt, mäsové peptony a tripteín. Agar TCBS je však pre väčšinu baktérií nehostinné médium.

Jeho vysoká selektivita je daná pridaním citrátu sodného a žlče; obe sú inhibičné činidlá, ktoré tiež poskytujú alkalické pH médiu, obmedzujú rast sprievodnej flóry a podporujú rast V. cholerae, medzi inými druhmi. Treba poznamenať, že Vibrio cholerae je veľmi citlivá na pálenie záhy.

Chlorid sodný vyrovnáva osmoticky s médiom. Okrem toho, pretože je jeho koncentrácia vysoká, pôsobí tiež ako inhibičné činidlo, ktoré podporuje rast halofilných baktérií.

Sacharóza je fermentovateľný cukor, ktorý spolu s modrými pH indikátormi brómtymolu a tymolovej modrej dávajú médiu diferenciálny charakter. Z tohto dôvodu je možné diferencovať kmene fermentujúce sacharózu z nefermentujúcich kmeňov.

Kolónie kmeňov fermentujúcich sacharózu sa vyvíja v žltej farbe a vďaka produkcii kyselín zmení médium zo zelenej na žltú. Nefermentory rastú priesvitne a médium zostáva pôvodnou farbou (zelená).

Podobne toto médium obsahuje tiosíran sodný ako zdroj síry a citrát železitý ako odhaľovacie činidlo. Obidva vykazujú baktérie schopné produkovať sírovodík (bezfarebný plyn). H2S sa tvorí z tiosíranu a neskôr sa nechá reagovať s citranom železitým, pričom sa vytvorí viditeľná čierna zrazenina.

Nakoniec agar je to, čo dáva pevnú konzistenciu médiu.

príprava

Odvážte 89 g dehydratovaného média a rozpustite v jednom litri destilovanej vody. Pomôcť rozpustenie zahrievaním a častým miešaním. Zmes sa môže variť 2 minúty.

Toto médium nie je autoklávované. Po jeho rozpustení sa podáva priamo na sterilných platniach. Pri stuhnutí sú usporiadané invertovane v zariadení na tvorbu plakov a uchovávané v chladničke (2 - 8 ° C) až do použitia..

Médium po príprave by malo mať pH 8,6 ± 0,2.

Farba dehydrovaného média je svetlo béžová alebo zeleno-béžová a farba média je lesná zelená alebo modrastozelená..

Pred zasiatím vzoriek je dôležité ponechať temperovanie platní.

použitie

Najbežnejšou vzorkou na izoláciu Vibrios sú hnačkové stolice.

Vzorky stolice, ak sa nedajú okamžite vysiať na selektívne médium, sa musia prepravovať v strede Caryho Blaira.

Na zvýšenie citlivosti kultúry môžu byť výkaly vedené cez peptónovú vodu pri pH 8,4 ako obohacujúce médium po dobu maximálne 8 hodín, odtiaľ sa subkultivujú do média TCBS..

Je tiež potrebné mať na pamäti, že niektoré kmene Vibrios môžu u pacientov s imunosupresiou spôsobiť septikémiu, takže môžu byť izolované z krvných kultúr. Podobne je možné analyzovať vzorky vody a potravín z mora v prípade epidémie epidémie cholery.

zasadený

Inokulum skúmanej vzorky musí byť zreteľné, očkovanie sa vykonáva metódou striacovania vyčerpaním. Platne sa inkubujú pri 37 ° C počas 24 hodín v aerobióze.

Predpokladané kolónie Vibrio cholerae Sú stredne veľké, hladké, nepriehľadné, s tenkými hranami a žlté, pretože kvasia sacharózu..

Podobným spôsobom, druh V. alginolyticus, V. fluvialis, V. hareyi, V. cincinnatiensis, V. furnissii, V. metschnikovii a niektoré V. vulnificus. Ostatné druhy Vibrios klinicky dôležité ako V. parahaemolyticus nefermentujú sacharózu, vyvíjajú sa ako olivovo zelené kolónie.

Na druhej strane musíme mať na pamäti, že niektoré kmene Aeromonas a Plesiomonas, ktoré sú oxidázou (+), môžu rásť v tomto médiu, pričom sa vyvíjajú žlté kolónie, ktoré môžu zmiasť klinika. Zatiaľ čo niektoré kmene Pseudomonas tiež oxidáza (+) rastú ako zelené kolónie, ako aj V. parahaemolyticus.

obmedzenia

Test oxidázy, ktorý je pozitívny na rod Vibrio, by sa nikdy nemal vykonávať z kolónií získaných z agaru TCBS, pretože získaný výsledok bude falošne negatívny. Zlúčeniny v médiu silne interferujú v tomto teste. Preto by sa mal vykonávať zo subkultúr na krvnom agare.

Kontrola kvality

Na preukázanie, že médium je v dobrom stave, sa odporúča zasadiť známe alebo certifikované kontrolné kmene a pozorovať, či rast spĺňa očakávané charakteristiky..

Za týmto účelom:

-Vibrio cholerae - Uspokojivý rast (žlté kolónie, priesvitná hranica).

-Vibrio parahaemolyticus - Uspokojivý rast (kolónia so zeleným stredom a priesvitná hranica).

-Vibrio alginolyticus ATCC 17749 - uspokojivý rast (žlté kolónie s halos rovnakej farby okolo kolónie).

-Enterococcus faecalis ATCC 29212 - úplná alebo čiastočná inhibícia (malé žlté alebo priesvitné kolónie).

-Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 - čiastočná alebo úplná inhibícia (modré kolónie).

-Escherichia coli ATCC 25922 - Úplne inhibovaný.

-Proteus mirabilis ATCC 43071 - Celková alebo čiastočná inhibícia. (Malé priesvitné okraje v strede kolónií).

Inkubácia neinokulovaného média by sa nemala meniť.

referencie

  1. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. TCBS agar. 2009. K dispozícii na adrese: f-soria.es
  2. Laboratórium BD. BD. TCBS Agar 2003. Dostupné na: bd.com
  3. Laboratories Britania. TCBS Medium. 2015. K dispozícii na adrese: britanialab.com
  4. Acumedia Laboratories Agar TCBS. 2016. K dispozícii na adrese: foodsafety.neogen.com
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologická diagnostika Bailey & Scott. 12 ed. Redakcia Panamericana S.A. Argentína.
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. 5. vydanie. Redakcia Panamericana S.A. Argentína.