Zdieľam:
Soy agar tripticaseína nadácie, príprava a použitie
sójový agar trypticasein alebo sójový agar tryptikázy je pevné, neselektívne a výživné kultivačné médium. Je označený písmenami TSA pre jeho akronym v angličtine Trypticase Soy Agar. Skladá sa z tripteínu, sójového peptónu, chloridu sodného a agaru.
Vďaka svojej vysokej nutričnej schopnosti je ideálny na pestovanie stredne náročných a nenáročných mikroorganizmov. Médium bez dodatočných doplnkov sa neodporúča pre primárne kultúry, ale je veľmi užitočné na subkultiváciu čistých kmeňov a udržanie ich životaschopnosti, okrem iných použití..
Tento agar tiež slúži ako základ pre prípravu obohatených médií, ako je krvný agar, najmä ak je potrebné pozorovať vzory hemolýzy a montovať taxóny optoquínu a bacitracínu, ktoré sú potrebné pri diagnostike. Streptococcus pneumoniae a Streptococcus pyogenes príslušne.
Na druhej strane, keď sa kombinuje s antibiotikami, je užitočné izolovať fakultatívne a prísne anaeróbne mikroorganizmy klinického významu zo vzoriek so zmiešanou flórou..
Nakoniec zloženie triptikalínového sójového agaru a jeho výkon spĺňa požiadavky stanovené v rôznych liekopisoch (európskych, japonských a severoamerických)..
index
- 1 Nadácia
- 2 Príprava
- 2.1. Platne so sójovým agarom na báze Tripticaseinu
- 2.2 Tiktoseín sójové agarové platne doplnené krvou
- 2.3 Sójové agarové platne s triptikázou doplnené zahrievanou krvou
- 2.4 Kliešte sójového agaru triptikáza
- 3 Použitie
- 4 Nasadené
- 5 Kontrola kvality
- 5.1 Kontrola sterility
- 5.2 Kontrola rastu
- 5.3 Kontrola rastu a vzoru hemolýzy sójového agaru triptikázy, doplneného krvou
- 6 Referencie
nadácie
Pre správny vývoj baktérií je nevyhnutná prítomnosť energie, ako sú aminokyseliny, vitamíny, purínové bázy a pyrimidíny.
V tomto zmysle poskytujú tripteín a sójový peptid tieto živiny mikroorganizmom, čo umožňuje ich úplný rozvoj. Pre náročné baktérie je však potrebné tento agar doplniť defibrinovanou krvou alebo zahriatou krvou, aby sa zvýšilo jeho obohatenie.
Na druhej strane, ak sa do média pridajú antibiotiká, stáva sa selektívnym médiom. Môžete tiež pridať 0,6% extraktu kvasiniek, aby ste podporili izoláciu druhov rodu Listeria, zatiaľ čo pridávate telurit cystínu a Ideálna je jahňacia krv Corynebacterium diphteriae.
Napokon chlorid sodný poskytuje osmotickú rovnováhu médiu a agar poskytuje pevnú konzistenciu.
príprava
Platne so sójovým agarom na báze Tripticaseinu
Na prípravu sójového agaru tryptikázy sa 40 gramov dehydratovaného komerčného média odváži v digitálnom meradle. Rozpúšťa sa v litri destilovanej vody obsiahnutej vo fiole.
Zmes sa nechá stáť 5 minút a potom sa privedie do zdroja tepla, aby sa napomohlo rozpusteniu média. Mieša sa často a nechá sa variť 1 alebo 2 minúty. Následne sa médium sterilizuje v autokláve pri 121 ° C počas 15 minút.
Nechá sa vychladnúť na 50 ° C a rozdelí sa do sterilných Petriho misiek. Nechajte stuhnúť, invertovať, objednať v plaquers a uložiť v chladničke.
Konečné pH média by malo byť 7,3 ± 0,2.
Je potrebné vziať do úvahy, že farba dehydratovaného kultivačného média je béžová a mala by sa skladovať pri teplote 10 až 35 ° C na suchom mieste..
Pripravený agar je svetlý jantár. Pripravené platne sa majú uchovávať v chladničke (2 až 8 ° C) až do použitia.
Dosky musia pred použitím dosiahnuť izbovú teplotu.
Tripticasein sójové agarové platne doplnené krvou
Krvný agar sa pripraví pridaním 5% defibrinovanej krvi v čase chladenia sójového agaru tryptikáza pri teplote 50 ° C. Zmes sa homogenizuje otáčaním jemnými pohybmi.
Podávajte v sterilných Petriho miskách. Farba média by mala byť čerešňovo červená.
Tripticasein sójové agarové platne doplnené ohrievanou krvou
Aby sa pripravil krvný agar na báze TSA, vyššie opísané postupy sú rovnaké, ale pri opustení autoklávu sa nechá stáť, kým teplota média nie je približne medzi 56 a 70 ° C. V tom čase sa krv umiestni a mieša, kým médium nezhnedne.
Podávajte v sterilných Petriho miskách. Farba média je čokoládovo hnedá.
Kliešte sójového agaru triptikáza
Postup prípravy agaru je rovnaký ako postup opísaný pre platne, s tým rozdielom, že namiesto podávania média na Petriho miskách sa pred sterilizáciou rozdelí medzi 10 a 12 ml do skúmaviek s bakelitovým vekom..
Následne sa skúmavky autoklávujú pri 121 ° C počas 15 minút. Pri odchode sa opierajú s pomocou podpory a umožňujú si upevnenie.
Pripravené kliny sú zasiate povrchom a slúžia na udržanie určitých náročných životaschopných mikroorganizmov po stanovenú dobu.
aplikácie
Sójový agar s tryptikáza sa používa v nasledujúcich prípadoch:
-Ako základ na prípravu klasického krvného agaru, ktorý sa bežne používa vo väčšine laboratórií.
-Izolácia náročných baktérií.
-Pozorovanie vzoru hemolýzy.
-Vykonávanie diagnostických testov.
-Ako základ pre prípravu špeciálneho krvného agaru Corynebacterium diphteriae, cystínom a krv jahňacieho mäsa.
-Ako základ pre prípravu jahňacieho krvného agaru, viac kanamycínu-vankomycínu na rast anaeróbov, najmä Bacteroides sp.
-Pre udržanie nenáročných kmeňov (Bacterioteca).
-Mikrobiálny aeróbny počet v mikrobiálnej limitnej štúdii vzoriek vody, životného prostredia, potravín a kozmetiky.
zasadený
Vzorky sa môžu naočkovať priamo na povrch sójového agaru tryptikázy, doplneného krvou alebo inými prísadami. Je zasiate vyčerpaním.
Zatiaľ čo triptikaseínové sójové agarové platne bez prísad sa všeobecne používajú na subkultiváciu mikrobiálnych kmeňov (baktérie alebo kvasinky)..
Kontrola kvality
Kontrola sterility
Na kontrolu sterility rôznych médií pripravených s tryptikázovým sójovým agarom sa odporúča urobiť nasledovné: z každej pripravenej šarže by sa jedna alebo dve platničky alebo skúmavky mali inkubovať bez inokulácie pri 37 ° C počas 24 hodín, aby sa preukázala sterilita. Vo všetkých prípadoch musí zostať bez rastu.
Ak sa zistí kontaminácia, celá dávka sa musí zlikvidovať.
Kontrola rastu
Na štúdium správneho fungovania tryptikázového sójového agaru sa môžu použiť nasledujúce bakteriálne kmene: \ t Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aerugiosa ATCC 9027 a Enterococcus faecalis ATCC 29212.
Kmene sa vysejú a inkubujú v aerobióze pri 37 ° C počas 24 hodín.
Vo všetkých prípadoch musí byť rast uspokojivý.
Môžete tiež použiť huby ako komplex Candida albicans ATCC 10231 a Aspergillus niger ATCC 16404. U oboch kmeňov sa očakáva dobrý rast.
Rastový a hemolýzny model sójového agaru triptikaseínu doplneného krvou
Na overenie správneho fungovania krvného agaru pripraveného s touto bázou je možné použiť nasledujúce kmene: Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 a Streptococcus pneumoniae ATCC 49619.
Sú zasiate a inkubované pri 37 ° C v mikroaerofiliku po dobu 24 hodín.
Vo všetkých prípadoch musí byť rast uspokojivý, berúc do úvahy skutočnosť, že v roku 2006. \ T S. pyogenes beta-hemolýzu (číry halo okolo kolónie) av oboch kmeňoch S. pneumoniae mala by sa pozorovať alfa hemolýza (nazelenalá halo okolo kolónií).
referencie
- Prispievatelia Wikipédie. Trypticase I am agar. Wikipédia, Voľná encyklopédia. 17. december 2018, 15:47 UTC. K dispozícii na adrese: https://en.wikipedia.org
- Laboratories Britania. Tryteínový sójový agar. 2015. K dispozícii na adrese: britanialab.com
- Neogen Laboratories Sójový triptych. K dispozícii na adrese: foodsafety.neogen.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologická diagnostika Bailey & Scott. 12 ed. Argentína. Panamericana S.A Editorial.
- BD Laboratories Trypticase Som Agar. 2014. K dispozícii na adrese: .bd.com