Základ, príprava a použitie agarovej soli a manitolu



soľný agar a manitol alebo slaný manitol je tuhé, selektívne a diferenčné kultivačné médium. Bol vytvorený Chapmanom na izoláciu patogénnych grampozitívnych kokov, najmä Staphylococcus aureus.

Je však tiež užitočné izolovať Staphylococcus epidermidis, ktoré môžu byť niekedy prítomné ako oportúnny patogén a Staphylococcus saprophyticus, medzi inými druhmi.

Niektoré Enterokoky sú schopné rásť v tomto médiu, ako aj určité grampozitívne spacotvorné bacily.

Toto médium je veľmi užitočné pri analýze klinických vzoriek, ale používa sa aj v mikrobiologickom štúdiu potravín a pri kontrole kvality priemyselných výrobkov, ako sú kozmetické výrobky, lieky, okrem iného..

Solený manitol agar sa skladá z extraktov a peptonov hovädzieho mäsa, tripteínu, manitolu, chloridu sodného, ​​fenolovej červene a agaru..

index

  • 1 Nadácia
  • 2 Príprava
  • 3 Použitie
  • 4 Kontrola kvality
  • 5 Záverečné úvahy
  • 6 Referencie

nadácie

Manitol agar je selektívny vďaka vysokej koncentrácii soli. Slanosť pôsobí ako inhibičná látka a zabraňuje rastu gramnegatívnych baktérií.

To je tiež rozdiel v dôsledku prítomnosti sacharidov manitolu a fenolového červeného pH indikátora. Z toho baktérie schopné fermentovať manitol produkujú kyseliny, acidifikujú médium, otáčajú kolónie a stredne žltú.

Na druhej strane kolónie, ktoré nefermentujú manitol, rastú v médiu, kde sa živiny dodávajú z extraktov a peptonov z mäsa a tripteíny. Odtiaľ baktérie extrahujú uhlík, dusík, vitamíny a minerály potrebné pre ich rast.

Kolónie v tomto prípade môžu byť slabé alebo silné ružové a médium zostáva rovnakej farby alebo zmeny fuchsie.

Agar je látka, ktorá poskytuje konzistenciu médiu.

príprava

Na prípravu jedného litra soleného manitolového agaru sa odvážilo 111 g dehydratovaného média v komerčnom obchodnom dome a rozpustilo sa v 1000 ml destilovanej vody s použitím fioly..

Teplo sa aplikuje častým odstraňovaním média na zlepšenie procesu rozpúšťania. Nechajte minútu variť.

Fiola sa umiestni do autoklávu pri 121 ° C na 15 minút.

Na konci času sa fiola vyberie z autoklávu, nechá sa stáť a podáva sa medzi 15 a 20 ml na sterilných Petriho miskách, keď je teplota približne 50 až 55 ° C..

Je povolené stuhnúť, usporiadať v obrátenej forme v plaqueros a držať v chladničke až do jeho použitia. Pred výsadbou vzorky musíte počkať, kým sa teplota dosky nezníži.

Doštičky sa vysiali skosením alebo siatím na povrch drigalski špachtľou. Konečné pH pripraveného média by malo byť 7,4 ± 0,2

Farba dehydrovaného média je svetlo béžová a farba pripraveného média je oranžovo červená.

aplikácie

Vďaka svojej vysokej selektivite je toto médium ideálne na výsadbu vzoriek so zmiešanou flórou, v ktorej sa chce hľadať prítomnosť Staphylococcus aureus, ako hlavný patogén tohto rodu.

V tomto zmysle je jedným z jeho najčastejších spôsobov použitia mikrobiologická analýza vzoriek faryngeálnych exsudátov a výtok z nosa, najmä na detekciu asymptomatických nosičov S. aureus.

Niektoré krajiny implementovali túto analýzu ako povinnú požiadavku pre ľudí, ktorí chcú pracovať ako dodávatelia potravín.

Táto kontrola zabraňuje najímaniu ľudí, ktorí sú nositeľmi S. aureus, tým sa zabráni masívnej otrave potravinami, v dôsledku konzumácie potravín kontaminovaných stafylokokovým enterotoxínom.

Môže byť tiež zahrnutý medzi očkovanie infekcií rán, krvných kultúr, CSF, bronchoalveolárnej laváže..

Solený manitolový agar je užitočný na opätovné izolovanie kolónií močových kultúr z CLED agaru alebo krvného agaru, ktorého Gram odhalil Gram-pozitívne koky v zhlukoch..

Platí to aj pri mikrobiologickej analýze potravín, pitnej vody, pôd a iných aplikácií.

Kontrola kvality

Akonáhle sa pripraví dávka platní so soleným manitovým agarom, odporúča sa vykonať kontrolu kvality. Kontrolné kmene sa zasiali, aby sa preukázalo, či je rast alebo nie.

Ako pozitívna kontrola sú známe známe kmene Staphylococcus aureus. Musí rásť uspokojivo vývojom žltých kolónií a médium sa tiež stáva rovnakou farbou.

Podobne je vhodné zahrnúť známy kmeň Staphylococcus epidermidis. Musí rásť uspokojivo vývojom ružových kolónií a médium zostane v rovnakej farbe alebo stmavne v silnejšej ružovej farbe.

Ako negatívna kontrola sa používajú kmene, ktoré by nemali rásť v tomto médiu. Napríklad, môžete zasadiť známy kmeň Escherichia coli alebo Klebsiella pneumoniae. Očakávaným výsledkom je úplná inhibícia, to znamená žiadny rast.

Okrem toho by sa mala inkubovať platňa bez inokulácie. V ňom by nemal byť žiadny rast, žiadna zmena farby.

Je dôležité, aby sa platňa nepoužila, ak existujú náznaky poškodenia, ako je kontaminácia, dehydratácia, zmena farby, okrem iného..

Záverečné úvahy

Pri použití soleného manitolového agarového média je potrebné vziať do úvahy niektoré dôležité aspekty: \ t

-Získanie rastu žltých kolónií neznamená, že je Staphylococcus aureus. Je potrebné pripomenúť, že niektoré kmene Enterococcus sú schopné rásť v tomto médiu a fermentovať manitol, ako aj určité grampozitívne bacily vytvárajúce spóry..

Preto je dôležité vykonať Gram do kolónie a katalázový test.

-Na druhej strane treba vychádzať z toho, že iné druhy Staphylococcus sa odlišujú od iných druhov aureus Sú tiež schopné fermentovať manitol. Preto je dôležité, aby sa kolónia subkultivovala na živný bujón, aby sa odtiaľ mohla odobrať a vykonať test koagulázy.

Medzi druhmi Staphylococcus klinicky dôležitými pre človeka kvasiaceho mannitolu patria: \ t S. aureus, S. simulans, S. capitis ssp capitis, S. capitis ssp urealyticus, S. xylosus, S. cohnii ssp urealyticum, medzi inými.

Iní môžu dať variabilnú reakciu, ktorá je niekedy pozitívna a niekedy negatívna. Niektoré sú S. saprophyticus, S. haemolyticus, S. warneri, S. intermedius, medzi inými.

-Neodporúča sa užívať kolónie priamo z manitolového agaru na vykonanie testu koagulázy, pretože vysoká koncentrácia soli v médiu môže interferovať s výsledkom..

-Nakoniec sa odporúča inkubovať platne naočkované soleným manitolom až 48 hodín, pretože niektoré kmene \ t S. aureus Môžu pomaly kvasiť manitol, aj keď to nie je príliš časté.

referencie

  1. Laboratories Britania. Slaný agar manitol. 2015. K dispozícii na adrese: britanialab.com
  2. "Solený manitol agar". Wikipédia, slobodná encyklopédia. 31. október 2018, 19:08 UTC. 17 január 2019, 20:55, k dispozícii na: en.wikipedia.org.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. (5. vydanie). Argentina, Editorial Panamericana S.A..
  4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologická diagnostika Bailey & Scott. 12 ed. Argentína. Panamericana S.A Editorial
  5. BD Laboratories BD Manitol Solný Agar. 2013. K dispozícii na adrese: bd.com.