Papa dextróza nadácie, príprava a použitie



papa dextrózový agar je to pevné, neselektívne živné kultivačné médium. Môže pestovať bakteriálne a plesňové druhy, ale jeho použitie je indikované najmä na izoláciu vláknitých húb a kvasiniek. Anglický výraz Potato Dextrose Agar je známy aj ako PDA médium.

Je obzvlášť užitočná na izoláciu fytopatogénnych húb, to znamená tých, ktoré ovplyvňujú rastliny. Na vysadenie vzoriek z infikovaných rastlín sa môžu použiť iné médiá, ako je napríklad Sabouraudov agar alebo maltový agar, ale pre rutinné použitie je preferovaný agar s dextrózou zemiakov kvôli väčšej sporulácii..

Používa sa aj na počítanie kolónií húb vo vzorkách kozmetiky, liečiv a niektorých mliečnych potravín. Podobne je vhodné pestovať vzorky kožných šrotov pri hľadaní dermatofytov, ktoré sa v tomto médiu veľmi dobre pestujú a vyvíjajú ich charakteristické pigmenty..

Médium zemiakovej dextrózy je veľmi jednoduché a ľahko sa pripravuje v laboratóriu. Ako už názov napovedá, obsahuje infúziu zemiakov, dextrózu a agar-agar. Okrem toho sa môžu pridať inhibičné látky, aby sa zabránilo rastu baktérií a zvýšila sa selektivita pre druhy húb.

index

  • 1 Nadácia
  • 2 Príprava
    • 2.1 - Domáca (nekomerčná) príprava papa dextrózového agaru
    • 2.2 - Komerčná príprava papa dextrózového agaru
  • 3 Použitie
    • 3.1 Proces výsadby vzoriek rastlín na agar zemiakovej dextrózy
    • 3.2 Postup výsadby vzoriek kožnej, vlasovej alebo nechtovej šupiny na papa dextrózovom agare
    • 3.3 Postup identifikácie
    • 3.4 Počet kolónií
    • 3.5 Udržiavanie kmeňov húb
  • 4 Kontrola kvality
  • 5 Referencie

nadácie

Papa dextrózový agar je kultivačné médium, ktoré poskytuje potrebné nutričné ​​prvky pre vývoj vláknitých húb a kvasiniek..

Kombinácia zemiakovej infúzie s glukózou poskytuje dokonalý zdroj energie pre uspokojivý rast húb. Kým agar je taký, ktorý poskytuje konzistenciu pre životné prostredie.

Médium samotné neinhibuje rast baktérií, takže ide o neselektívne médium. Aby to bolo selektívne, potrebujete pridanie inhibičných látok, ako je kyselina vínna alebo antibiotiká.

príprava

-Domáca (nekomerčná) príprava zemiakového dextrózového agaru

Petriho misky

Pripravuje sa nasledujúcim spôsobom:

V prvom rade sa zemiaky veľmi dobre umyjú, čím sa odstránia nečistoty. Sú narezané na tenké plátky so všetkým a škrupinou. 200 g zemiakov sa odváži a pol hodiny sa varí v litri destilovanej vody.

Po čase sa prefiltruje alebo napne všetok prípravok cez gázu.

Získaná kvapalina sa doplní destilovanou vodou, až kým nedosiahne jeden liter. Do infúzie sa pridá 20 g agaru a 20 g dextrózy, zmes sa dobre premieša a autoklávuje pri 121 ° C pri tlaku 15 libier za 15 minút..

Nechajte vychladnúť na 50 ° C a podávajte v sterilných Petriho miskách. Pripravené platne sa uchovávajú v chladničke.

kliny

Môžete tiež pripraviť papa dextrózové agarové kliny.

V tomto prípade sa pred sterilizáciou v autokláve 12 až 15 ml média umiestni do skúmaviek, potom sa autoklávujú a pri odchode ležia na špeciálnych nosičoch až do stuhnutia. Uložiť do chladničky.

Médium zostáva pri pH 5,6 ± 0,2, avšak niektoré laboratóriá pridávajú 10% kyselinu vínnu na zníženie pH na 3,1 ± 0,1, aby sa inhiboval rast baktérií..

V tom istom zmysle iné laboratóriá dávajú prednosť pridaniu antibiotík, aby boli selektívne na pestovanie húb a zabránili vývoju baktérií.

-Komerčná príprava agarového zemiakového dextrózy

Navážte 39 g komerčne dostupného dehydratovaného média a rozpustite v jednom litri destilovanej vody. Nechajte v pokoji 5 minút.

Zmes sa často zahrieva miešaním až do úplného rozpustenia. Následne sa sterilizuje v autokláve pri 121 ° C počas 15 minút.

Môžu byť pripravené platne alebo kliny. Postupujte podľa vyššie uvedeného postupu.

PH zostáva na 5,6 ± 0,2. Ak sa požaduje pH 3,1, pred podaním na platne sa pridá 14 ml 20% sterilnej kyseliny vínnej..

Farba nepripraveného média je béžová a pripravená je svetlo jantárová s mierne zakaleným alebo opaleskujúcim vzhľadom.

aplikácie

Spôsob pestovania rastlinných vzoriek v agare zemiakovej dextrózy

-Na listy so škvrnami

Listy sú narezané na kúsky.

V 50 cm3 skle s 50% alkoholom umiestnite kúsky listov (kúsky zafarbené a zdravé), aby sa povrch dezinfikoval 20 až 30 sekúnd. Vytiahnite alkohol a pridajte 20% chlórnan sodný počas 40 až 50 sekúnd, ak sú tenké listy a ak je kôra a guľatina, predĺžte čas na 80 sekúnd..

Vytiahnite chlórnan sodný a odoberte dezinfikované kúsky sterilným klipom a položte ich na povrch média (maximálne 10 kusov). Vložte dátum a inkubujte pri teplote 20 až 30 ° C.

-Na ovocie a hľuzy

Ak je ovocie mäsité, otvorte ovocie postihnuté hubou a odoberte kúsky sterilným skalpelom, a to ako chorú časť, tak zdravú časť a položte ju na povrch agaru..

Ak je ovocie citrusové, ako je citrón alebo pomaranč, mali by ste otvoriť a zasiať svoje semená.

Po zasiahnutí povrchu plodu a pozorovaní spór je najlepšie použiť na platni metódu strúhania; spočíva v tom, že sa spóry dotýkajú špachtľou vo forme "L" sterilizovanej a ochladenej, a potom sa vykoná 2 až 3 krát cik-cak očkovania na agare..

-Pre zrná

Dezinfikujú sa podľa opisu v listoch a potom sa umiestnia na agar.

-Pre vetvy a stonky

Uskutoční sa zoškrabanie kôry a potom sa odoberú kúsky zdravej a chorej časti priamo na agar..

Vysiate doštičky sa inkubujú v aerobióze pri teplote 20 až 30 ° C počas 72 hodín.

Spôsob pestovania vzoriek kože, vlasov alebo nechtových šupín na papa dextrózovom agare

Vzorka sa musí odobrať pomocou skalpelu č. 11, buď na odstránenie postihnutých vlasov, kožných vločiek alebo nechtov pri hľadaní dermatofytov. Pred odobratím vzorky by sa mala oblasť dezinfikovať 70% alkoholom.

-Vzorka kože

V šupinatých léziách by mal byť okraj lézie zoškrabaný, pretože je pravdepodobnejšie, že sa huba nachádza.

V exsudatívnych léziách sa vzorka odoberá suchým alebo mokrým tampónom. Okamžite vysejte na agar zemiakovej dextrózy alebo agaru Sabouraud. Vyhnite sa dopravným prostriedkom.

Ďalšia metóda odberu vzoriek je cez techniku ​​štvorcových kobercov Mariat a Adan Campos. V tomto prípade je postihnutá oblasť 5 krát trepaná kusom sterilnej vlny na ďalšiu kultiváciu.

Vzorka sa môže umiestniť priamo do kultivačného média.

-Vzorka vlasov

V závislosti od patológie môže byť postihnutá časť odrezaná alebo odtrhnutá koreňmi. Vzorka sa umiestni do kultivačného média.

-Vzorka nechtov

Môžete zoškrabať alebo narezať konkrétnu časť postihnutého nechtu. Závisí to od typu zranenia.

Pred výsevom sa vzorka rozreže na 1 mm kúsky, aby sa zvýšila pravdepodobnosť kontaktu huby s kultivačným médiom.

Postup identifikácie

Kolónie získané na platni sa izolujú v skúmavkách obsahujúcich agar zemiakovej dextrózy, aby sa uskutočnilo makroskopické štúdium kolónií (vzhľad, farba, konzistencia, stupeň vývoja)..

Mikroskopické štúdium (pozorovanie štruktúr a ich formácií) sa môže uskutočniť mikrokultúrami alebo priamym pozorovaním pod mikroskopom medzi lamelami a lamelami..

Počet kolónií

Toto médium sa môže tiež použiť na stanovenie zaťaženia húb a kvasiniek prítomných vo vzorkách rastlín, potravinách, kozmetike alebo liekoch. Na tento účel sa používa papa dextrózový agar doplnený antibiotikami, ako sú: (chloramfenikol, chlórtetracyklín alebo obidva).

Nalejte 1 ml vzorky - prednostne zriedenej - do sterilnej a prázdnej Petriho misky, potom roztavte zemiakový dextrózový agar a nechajte vychladnúť na 45 ° C. Nalejte cez Petriho misku a otáčajte až do homogenizácie. Nechajte ho v pokoji, kým neztuhne.

Inkubujte v aerobióze pri teplote 20 - 25 ° C (plesne) alebo pri teplote 30 - 32 ° C (kvasinky) počas 5 až 7 dní alebo viac v závislosti od typu požadovanej huby a typu vzorky. Na inkubáciu v oboch teplotných rozsahoch sa môžu použiť dve platne.

Udržiavanie kmeňov húb

Papa dextrózový agar sa môže použiť na udržanie životaschopných kmeňov húb už niekoľko rokov.

Na tento účel sa huba pestuje v papa dextrózových agarových kliešťach a po vypestovaní huby sa pokryje minerálnym olejom. Olej sa musí sterilizovať v autokláve počas 45 minút a má približnú viskozitu 300 až 330 Saybolt. Olej by mal presahovať hrot skosenia o 1 až 2 cm.

Kontrola kvality

Z každej pripravenej dávky sa odoberú jedna alebo dve platne a inkubujú sa pri teplote 25 ° C počas 48 hodín alebo pri teplote 20 ° C počas 96 hodín. Dobrá kontrola sterility je taká, pri ktorej nedochádza k vývoju kolónií.

Tiež známe alebo certifikované kontrolné kmene, ako sú: \ t

Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763, Candida albicans ATCC 10231, Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533. Vo všetkých prípadoch sa očakáva dobrý rast.

referencie

  1. Laboratories Britania. Papa glukozado agar. 2015. K dispozícii na adrese: britanialab.com
  2. Neogen Laboratories Agar s zemiakovou dextrózou. K dispozícii na adrese: foodsafety.neogen.com
  3. Insumolab Laboratory Agar so zemiakovou dextrózou. K dispozícii na: insumolab.cl
  4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologická diagnostika Bailey & Scott. 12 ed. Redakcia Panamericana S.A. Argentína.
  5. Casas-Rincon G. Všeobecná mykológia. 1994. 2. ed. Universidad Central de Venezuela, edície knižnice. Venezuela, Caracas.
  6. Aceituno M. Hodnotenie mikrobiologickej kvality očných tieňov, kompaktný práškový typ národného výrobného laboratória, podľa Pharmacopeia Usp Reference Method 2005. Diplomová práca má nárok na titul Pharmaceutical Chemist. Universidad de San Carlos de Guatemala.
  7. Cuétara M. Spracovanie povrchových vzoriek. Časopis Iberoamerican Mycology Magazine. 2007; pp. 1-12