Výživný agarový základ, príprava a použitie



výživný agar je to neselektívne a nediferenčné pevné kultivačné médium. V tomto prostredí rastú všetky druhy baktérií, ktoré nie sú náročné z hľadiska výživy.

Je to jednoduchý spôsob a napriek svojmu názvu obsahuje nižšiu nutričnú hodnotu v porovnaní s inými podobnými médiami, ako je napríklad agar s infúziou mozgového srdca alebo sójový agar s tryptikázou.

Jeho užitočnosť v laboratóriu je veľmi rôznorodá. Používa sa hlavne na subkultúru druhov, udržiavanie kmeňov, počítanie kolónií, ako základ pre prípravu krvného agaru, okrem iného..

Podobne, vďaka svojej svetlej béžovej farbe, produkcia pigmentov vytvorených niektorými bakteriálnymi kmeňmi, ako je napríklad zelenkastý pigment Pseudomonas aeruginosa, tehlovo červený pigment vyrobený firmou Serratia marcescens pri izbovej teplote, zlatožltý pigment Staphylococcus aureus, medzi inými.

Okrem toho je jedným z najúspornejších rastových médií na trhu.

index

  • 1 Nadácia
  • 2 Zloženie
  • 3 Príprava
  • 4 Použitie
    • 4.1 Ako základ pre prípravu krvného agaru
    • 4.2 Stimulovať sporuláciu baktérií vytvárajúcich spóry
    • 4.3 Údržba kmeňa
    • 4.4 Počítanie kolónií
    • 4.5 Vykonanie diagnostických testov
    • 4.6 Obnova mezofilných aeróbnych rekreačných slaných vôd (Pláže) \ t
  • 5 Referencie

nadácie

Ako už bolo spomenuté, je to veľmi jednoduchý prostriedok, ktorý je založený na poskytovaní nutričných látok pre rast baktérií bez obmedzenia a bez komplexných reakcií na interpretáciu.

Keďže médium je priesvitné, je ideálne na počítanie kolónií metódou výsevu do hĺbky.

zloženie

Skladá sa hlavne z mäsového extraktu alebo kvasnicového extraktu, peptonov alebo pankreatickej želatíny, agaru, chloridu sodného a destilovanej vody..

Extrakt z mäsa alebo kvasiniek a peptonov predstavuje zdroje uhlíka a esenciálnych minerálov (dusík, fosfor a síra), ktoré budú používať baktérie ako zdroj energie a rastové faktory.

Podobne agar-agar je základom všetkých pevných rastových médií, ktoré nahrádzajú želatínu, ktorá bola prvou základnou zlúčeninou používanou Robertom Kochom, aby poskytol médiám pevnú konzistenciu..

Agar je polysacharid zložený z galaktózy, galaktomanánu, agarózy a agaropectínu. Nastavuje sa na 40 ° C a topí sa blízko 100 ° C.

Chlorid sodný poskytuje médiu osmolaritu potrebnú na vývoj baktérií.

Nakoniec voda slúži na hydratáciu a rozpustenie lyofilizovaných zlúčenín. Má sa použiť destilovaná voda upravená na neutrálne pH. Voda z vodovodu by sa nemala používať, pretože obsahuje vápnik a horčík, ktoré môžu reagovať s fosfátmi v médiu a vytvárať nerozpustné soli.

príprava

Na jeden liter výživného agaru sa odváži 31 g dehydratovaného média. Umiestni sa do fioly a rozpustí sa v litri destilovanej vody. Po 5 minútach odpočinku zahrejte na zdroji tepla a nepretržite premiešajte, kým sa varí 1 alebo 2 minúty.

Potom sa fiola umiestni do autoklávu a sterilizuje sa pri 121 ° C počas 20 minút.

Na konci času sa vyberie z autoklávu a podáva sa v sterilných Petriho miskách s použitím digestora s laminárnym prúdením alebo horáka Bunsen..

Ak sú Petriho misky na jedno použitie (plast), médium by sa malo distribuovať, keď má agar teplotu približne 50 ° C, aby sa zabránilo ich deformácii nadmerným teplom..

Nechajte tuhnúť a skladujte v držiaku platní prevrátenom a chladené pri teplote 2-8 ° C až do použitia.

Platne sa musia pred zasiatím temperovať. Výživné agarové platne by sa nemali používať, ak sú kontaminované alebo dehydratované.

Hodnota pH pripraveného média by mala byť nastavená na 7,3 ± 0,2.

aplikácie

Je to najjednoduchšie kultivačné médium používané v mikrobiologickom laboratóriu. Jeho zloženie je vynikajúce pre rast nenáročných baktérií.

Jeho hlavné použitia sú vysvetlené nižšie:

Ako základ pre prípravu krvného agaru

Toto médium sa niekedy používa ako základ na prípravu krvného agaru, nie je to však najčastejšie používaná báza.

Stimulovať sporuláciu baktérií tvoriacich spóry

Toto kultivačné médium je zvlášť užitočné na stimuláciu sporulácie baktérií tvoriacich spóry, ako je napr Bacillus sp.

Na tento účel sa zasial kmeň rodu bacil a inkubovali sa 24 hodín pri 37 ° C v aerobióze. Akonáhle sa kolónie vypestujú, platňa sa vystaví teplotnému namáhaniu, to znamená, že teplota pece sa zvýši na 44 ° C a ponechá sa ďalších 24 hodín alebo sa zavedie do chladničky na 24 hodín..

Na konci kultivácie sa kultúry predĺžia a zafarbia sa farbením Gramom alebo sfarbením spór Shaeffer-Fulton. V nich budú pozorované bacily s endosporami (spóry vo vnútri bacilu) a exosporami (spóry mimo bacilu)..

Údržba kmeňa

Niektoré výskumné laboratóriá alebo laboratóriá na podporu univerzitného vyučovania musia udržiavať životaschopné klinicky dôležité baktérie tak dlho, ako je to len možné, aby sa mohla používať banka baktérií (bakteriotheca) na výskumnú prácu alebo na prípravu vyučovacích postupov. Študenti sa naučia manipulovať a identifikovať tieto mikroorganizmy.

Na tento účel sa môže použiť výživný agar, ako aj agar s infúziou mozgového srdca. Pripraví sa agar, naleje sa do skúmaviek s bakelitovým uzáverom a nakloní sa na základni tak, aby agar stuhol a vytvoril blok na dne a skosenie na povrchu (vrchol píku).

Každá skúmavka je označená umiestnením názvu baktérií, ktoré sa majú zasadiť, a dátumom. Na ráme sa každá z baktérií vysadí a inkubuje 24 hodín, akonáhle sa kolónie pestujú, skúmavky sa skladujú pri teplote miestnosti..

Bakterioteca sa musí obnoviť od 1 do 3 mesiacov, aby sa zabránilo kontaminácii a dehydratácii média, ako aj smrti baktérií..

Týmto spôsobom je možné udržiavať len nenáročné baktérie.

Počítanie kolónií

Hoci existujú špecializované prostriedky na počítanie kolónií, ako je štandardný počítací agar, na tento účel sa môže použiť výživný agar, buď siatím na povrch drigalski špachtľou alebo hĺbkou. Preto je veľmi užitočný pri mikrobiologickej analýze potravín a vody.

Vykonávanie diagnostických testov

Pretože ide o médium, ktoré neobsahuje krv, ani žiadnu inú prísadu, je ideálne vziať kolónie pestované na tomto médiu, aby sa vykonal katalázový test..

Podobne, kvôli svojej čírej farbe, je indikované vykonávať oxidázové testy priamo na ploche naočkovaného agaru, bez interferencie..

Obnova mesofilných aeróbnych rekreačných slaných vôd (Pláže)

Živný agar pripravený s 10% morskou vodou je vhodný na hodnotenie mezofilných aeróbov v plážových vodách.

Týmto spôsobom môžeme oceniť úroveň skutočnej kontaminácie vôd týmito mikroorganizmami, pretože v tomto type vzoriek sa výsledky prekrývajú pri použití kultivačného média pripraveného konvenčným spôsobom..

To demonštrovali Cortez et al. v roku 2013 vo výskumnej práci.

To je možné vysvetliť náhlymi zmenami, ktoré baktérie podstúpia pri prechode z prostredia s hyper-fyziologickým prostredím do prostredia s nízkym obsahom soli, preto mikroorganizmy vstupujú do stavu letargie, v ktorom sú životaschopné, ale nie kultivovateľné..

referencie

  1. "Výživný agar." Wikipédia, slobodná encyklopédia. 13 Sep 2016, 20:33 UTC. 29. december 2018, 21:04 sk.wikipedia.org
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologická diagnostika Bailey & Scott. 12 ed. Argentína. Panamericana S.A Editorial.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. (5. vydanie). Argentina, Editorial Panamericana S.A..
  4. Cortez J, Ruiz Y, Medina L, Valbuena O. Účinok kultivačných médií pripravených s morskou vodou na zdravotné ukazovatele v morských vodách kúpeľov Chichiriviche, štátu Falcón, Venezuela. Rev Soc Come Microbiol 2013; 33: 122-128
  5. Paredes V, Dias V, Silva de Almeida M a Cardoso M. Mikrobiologická kvalita vody na insemináciu dávok pre Suinos.Cient.Agro.Amaz. 2013; 1 (2): 42-49.
  6. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktická klinická mikrobiológia. Univerzita v Cadiz, 2. vydanie. UCA Publications Service.