MacConkey Agar základy, príprava a použitie

Agar MacConkey Je to pevné kultivačné médium, ktoré umožňuje exkluzívnu izoláciu gramnegatívnych bacilov. Z tohto dôvodu je to selektívne médium a tiež umožňuje rozlišovať medzi fermentačnými a nefermentujúcimi bacilmi laktózy, čo z neho robí diferenciálne médium. Je to jedno z najrozšírenejších kultivačných médií v mikrobiologickom laboratóriu.

Toto médium sa používa hlavne na izoláciu gramnegatívnych bacilov patriacich do rodiny Enterobacteriaceae, vrátane oportúnnych a enteropatogénnych druhov.

Môže byť tiež použitý na izoláciu iných enterických bacilov, ktoré obývajú gastrointestinálny trakt, ale nepatria medzi Enterobacteriaceae, ako Aeromonas sp, Plesiomonas sp, medzi inými.

Nakoniec môže izolovať iné gramnegatívne, nefermentujúce glukózové bacily, ktoré sa nachádzajú v životnom prostredí, vo vode alebo v pôdach, ale niekedy môžu byť oportúnnymi patogénmi, ako sú napr. Pseudomonas sp, Acinetobacter sp, Alkaline sp, Chromobacterium violaceum, Stenotrophomonas maltophilia, medzi inými.

index

• 1 Nadácia
  • 1.1 MacConkey Agar
• 2 Príprava
• 3 Použitie konvenčného agaru MacConkey
• 4 Ďalšie varianty agaru MacConkey
  • 4.1 Agar MacConkey so sorbitolom
  • 4.2 Agar MacConkey bez kryštálovej violety alebo soli
  • 4.3 Agar MacConkey s cefoperazónom
  • 4.4 Agar MacConkey pripravený s 10% morskou vodou v / v
• 5 Referencie

nadácie

Agar pre MacConkey

Základ tohto média možno vysvetliť opisom jeho zložiek, pretože každý má svoj účel, ktorý určuje jeho vlastnosť.

Žlčové soli a fialový kryštál

V tomto zmysle má MacConkey agar komplexné zloženie. Najprv obsahuje žlčové soli a fialový kryštál.

Tieto elementy sú zodpovedné za inhibíciu rastu grampozitívnych baktérií a niektorých náročných gramnegatívnych bacilov. Na druhej strane podporuje vývoj gramnegatívnych bacilov, ktoré nie sú týmito látkami ovplyvnené. Preto je to selektívne médium.

Hovorí sa, že je mierne selektívny v porovnaní s inými médiami, ktoré tiež inhibujú rast grampozitívnych baktérií a tiež väčšiny gramnegatívnych baktérií..

Je mimoriadne selektívny pre špecifický rod, ako je napríklad TCBS agar na izoláciu Vibrio cholerae a iné podobné halofilné a alkalofilné druhy.

Peptony, polypektóny a laktóza

Obsahuje látky, ktoré poskytujú potrebné živiny pre mikroorganizmy, ktoré sa vyvíjajú v tomto médiu, ako sú peptony, polypektóny a laktóza.

Laktóza je kľúčovým bodom pre to, aby médium bolo diferencovaným médiom, pretože mikroorganizmy, ktoré majú schopnosť fermentovať laktózu, vyvinú silné ružové kolónie..

Niektoré baktérie môžu pomaly alebo slabo kvasiť laktózu, pričom vytvárajú svetlé ružové kolónie a zostávajú pozitívnou laktózou.

Tí, ktorí nefermentujú laktózu, používajú peptony ako zdroj energie, produkujúc amoniak, alkalizujúci médium. Preto kolónie, ktoré pochádzajú, sú bezfarebné alebo transparentné.

Indikátor PH

Zmena farby sa dosahuje pomocou inej základnej zlúčeniny, ktorá obsahuje agar MacConkey. Táto zlúčenina je indikátor pH, ktorý je v tomto prípade neutrálne červený.

Fermentácia laktózy vytvára produkciu zmesných kyselín. Okyslia médium pri pH nižšom ako 6,8..

To spôsobí, že indikátor pH sa otočí smerom k intenzívnemu ružovému odtieňu. Intenzita farby sa môže líšiť v závislosti od konečného pH.

Destilovaná voda, chlorid sodný a agar

Na druhej strane obsahuje destilovanú vodu a chlorid sodný, ktoré dodávajú médiu hydratáciu a osmotickú rovnováhu. Nakoniec médium obsahuje agar, ktorý je bázou, ktorá poskytuje konzistenciu pevného média.

Pripravené agarové médium MacConkey musí mať konečné pH upravené na 7,1 ± 0,2..

príprava

Na jeden liter MacConkeyovho agaru sa odváži 50 g dehydratovaného média, potom sa umiestni do fioly a rozpustí sa v jednom litri destilovanej vody. Po 10 minútach odpočinku sa zahrieva nepretržite miešaním až do varu 1 minútu.

Potom vložte fiolu do autoklávu a sterilizujte pri 121 ° C počas 20 minút. Na konci času sa vyberie z autoklávu a nechá sa vychladnúť na teplotu 45 ° C, potom sa podáva v sterilných Petriho miskách v digestore s laminárnym prúdením alebo pred horákom Bunsen..

Nechajte tuhnúť a skladujte v držiaku platní prevrátenom a chladené pri teplote 2-8 ° C až do použitia.

Na získanie agaru MacConkey, ktorý inhibuje efekt tvorby opuchu produkovaného rodom Proteus, sa používa agar s nízkym obsahom soli MacConkey..

Použitie konvenčného agaru MacConkey

Agar MacConkey je zahrnutý vo všetkých sériách kultivačných médií, ktoré sú usporiadané na siatie klinických vzoriek získaných v laboratóriu. Je tiež užitočná v potravinárskej mikrobiológii a environmentálnej mikrobiológii.

Rozmanitosť gramnegatívnych bacilov, ktoré rastú v tomto médiu, exprimuje fenotypové charakteristiky, ktoré napomáhajú predpokladanej diagnóze daného druhu. Napríklad veľkosť, farba, konzistencia a vôňa kolónií sú niektoré z charakteristík, ktoré môžu viesť.

V tomto prostredí, druhy Escherichia coli, Klebsiella sp a Enterobacter sp produkujú silné ružové kolónie, obklopené oblasťou vyzrážanej žlče.

V čo najväčšom počte baktérií Citrobacter sp, Providencia sp, Serratia sp a Hafnia sp môžu sa objaviť bez farby po 24 hodinách alebo bledoružovej po 24 -48 hodinách.

Podobne rod Proteus, Edwadsiella, Salmonella a Shigella produkujú bezfarebné alebo transparentné kolónie..

Ďalšie varianty agaru MacConkey

Existujú aj iné varianty agaru MacConkey, ktoré majú špecifické účely. Ďalej sú uvedené:

Agar MacConkey so sorbitolom

Toto médium bolo navrhnuté na rozlíšenie enteropatogénneho kmeňa (Escherichia coli enterohemoragickej O157: H7) zvyšku kmeňov Escherichia coli.

Toto médium mení sacharidovú laktózu na sorbitol. Kmene E. coli enterohemoragické O157: H7 sa od ostatných líšia, pretože nekvasia sorbitol, a preto sa získajú transparentné kolónie, avšak zvyšok kmeňov E. coli ak fermentujú sorbitol a kolónie sú silné ružové.

Agar MacConkey bez kryštálovej violety alebo soli

Tento agar sa značne líši od klasického agaru MacConkey, pretože nemá kryštálovo fialovú, grampozitívne baktérie môžu rásť..

Na druhej strane, neprítomnosť soli inhibuje výskyt rojenia na agare produkovanom niektorými enterickými bacilmi, ako sú rody rodu. Proteus, a tak uľahčujú izoláciu všetkých prítomných baktérií, vrátane grampozitívnych baktérií.

Agar MacConkey s cefoperazónom

Tento variant agaru MacConkey bol navrhnutý tak, aby sa pôvodne izoloval Laribacter hongkongensis a neskôr si uvedomili, že je to užitočné pre izoláciu Arcobacter butzleri.Obidva sú mierne zakrivené negatívne gram-bacily odolné voči cefoperazónu.

Tieto baktérie boli v poslednej dobe spojené ako príčiny gastroenteritídy a hnačky získané u ázijských a európskych jedincov, ktoré sa objavili ako dva silné vznikajúce patogény.

Antibiotikum umožňuje inhibovať sprievodnú flóru gastrointestinálneho traktu, čo napomáha rozvoju týchto baktérií, čo im bráni nepozorovanému pozorovaniu, pretože vyžadujú 72 hodín na rast..

Agar MacConkey pripravený s 10% morskou vodou v / v

Tento variant je užitočný pri hodnotení bakteriálnych zdravotných indikátorov fekálnej kontaminácie, vrátane totálnych koliformných baktérií a fekálnych koliformných baktérií v rekreačných slaných vodách (pláže a zálivy)..

Cortez a kol. 2013 ukázali, že takto pripravené médium významne zvyšuje regeneráciu týchto mikroorganizmov v prostredí s fyziologickým roztokom v porovnaní s použitím agaru MacConkey pripraveného s destilovanou vodou..

Je to preto, že modifikované médium stimuluje rast baktérií, ktoré sú fyziologicky v stave dormácie "životaschopné, ale nekultivovateľné", a preto nie je možné ich získať v bežných médiách.

referencie

1. Lau SK, Woo PC, Hui WT a kol. Použitie cefoperazonu MacConkey agaru na selektívnu izoláciu. \ T Laribacter hongkongensis. J. Clin. Microbiol. 2003; 41 (10): 4839-41.
2. "MacConkey Agar." Wikipédia, slobodná encyklopédia. 4 Apr 2018, 18:16 UTC. 29. december 2018, 15:22 en.wikipedia.org
3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologická diagnostika Bailey & Scott. 12 ed. Argentína. Panamericana S.A Editorial.
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. (5. vydanie). Argentina, Editorial Panamericana S.A..
5. Cortez J, Ruiz Y, Medina L, Valbuena O. Účinok kultivačných médií pripravených s morskou vodou na zdravotné ukazovatele v morských vodách kúpeľov Chichiriviche, štátu Falcón, Venezuela. Rev Soc Come Microbiol 2013; 33: 122-128
6. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktická klinická mikrobiológia. Univerzita v Cadiz, 2. vydanie. UCA Publications Service.