Základ, príprava a použitie Agar LIA (Lysine Iron)



LIA agar (Lyzínové železo) je biochemický test používaný na identifikáciu baktérií z čeľade Enterobacteriaceae. Toto médium vytvorili Edwards a Fife na základe Falkowovho vzorca.

Pôvodne bol tento test živný roztok obsahujúci peptony, kvasinkový extrakt, glukózu, L-lyzín, brómkrezolovú purpur a destilovanú vodu. Edwards a Fife pridali agar-agar, citrát železitý amónny a tiosíran sodný.

Test v podstate spočíva v preukázaní prítomnosti enzýmu lyzín dekarboxylázy, ktorý je schopný reagovať s karboxylovou skupinou aminokyseliny L-lyzínu. Deaminácia aminokyseliny môže tiež nastať v dôsledku prítomnosti enzýmu lyzín deaminázy.

Okrem toho zloženie média umožňuje demonštrovať schopnosť niektorých bakteriálnych rodov produkovať sírovodík. Nakoniec je tiež možné pozorovať generáciu alebo nie plyn v strede.

index

  • 1 Nadácia
    • 1.1 Peptony a kvasinkový extrakt
    • 1.2 Glukóza
    • 1,3 L-lyzín
    • 1,4 pH indikátor (brómkrezolová purpurová)
    • 1,5 citrát amónny a tiosíran sodný
  • 2 Interpretácia testu
    • 2.1 Dekarboxylácia lyzínu
    • 2.2 Deaminácia lyzínu
    • 2.3 Výroba sírovodíka (H2S) \ t
  • 3 Záznam výsledkov
  • 4 Príprava
  • 5 Použitie
  • 6 Referencie

nadácie

Peptony a kvasinkový extrakt

Podobne ako väčšina kultivačných médií, agar obsahujúci lyzín železa obsahuje zložky, ktoré poskytujú zdroj živín potrebných na rast baktérií. Tieto zložky sú reprezentované peptonmi a kvasinkovým extraktom.

glukóza

Tento agar tiež obsahuje fermentovateľnú sacharidovú glukózu. Je známe, že všetky baktérie z čeľade Enterobacteriaceae fermentujú glukózu.

Tento krok je rozhodujúci, pretože bude zodpovedný za okyslenie média, čo je základnou podmienkou pre enzým lyzín dekarboxylázu, ak je prítomný, aby pôsobil na jeho substrát..

V niektorých bakteriálnych rodoch je možné pozorovať produkciu plynu spôsobenú fermentáciou glukózy.

Plyn sa preukazuje, keď sa v trubici vytesní agar, pričom na dne skúmavky zostane prázdny priestor, alebo sa médium rozdrví v dvoch alebo viacerých častiach..

L-lyzín

Po dekarboxylácii lyzínu sa vytvorí diamín (kadaverín) a oxid uhličitý.

K dekarboxylácii dochádza v prítomnosti koenzýmového pyridoxal fosfátu. Táto reakcia je nezvratná.

Indikátor PH (brómkrezolová purpurová)

Všetky zmeny pH, ku ktorým došlo v médiu rôznymi reakciami, sa detegujú pomocou bromokrezolového purpurového pH indikátora.

V tomto zmysle sa pri okyslení médium zmení na žlté a pri alkalizácii sa médium vráti do pôvodnej fialovej alebo fialovej farby..

Keď dôjde k deaminácii lyzínu prítomnosťou enzýmu lyzín deaminázy, na povrchu sa vytvorí červenkastá farba, typická pre rody Proteus, Providencia a niektoré druhy Morganella..

Je to spôsobené tým, že počas procesu deaminácie vzniká kyselina alfa-keto-uhličitá, ktorá reaguje s citrátom amónnym v prítomnosti kyslíka, čo spôsobuje vyššie uvedenú farbu..

Citrát amónny a tiosíran sodný

Na druhej strane budú baktérie, ktoré produkujú sírovodík, dokazované prítomnosťou tiosíranu sodného (zdroj síry) a citrátu železito-amónneho, ktorý je tvorcom H2S.

Baktérie, ktoré majú tiosulfát reduktázový enzým, majú schopnosť pôsobiť redukciou prítomného tiosíranu sodného, ​​čím sa vytvára siričitan a sírovodík (H).2S).

Posledne menovaný je bezfarebný plyn, ale keď reaguje so železnou soľou, tvorí kovový sulfid kovu, ktorý je nerozpustnou zlúčeninou (viditeľná čierna zrazenina)..

Avšak kapacita H formácie2S s týmto médiom nie je veľmi spoľahlivý, pretože niektoré negatívne lyzín decarboxylázové baktérie schopné produkovať H2S nebude tvoriť čiernu zrazeninu, pretože kyslosť média interferuje. Preto sa odporúča skontrolovať s inými prostriedkami, ktoré obsahujú železo.

Interpretácia testu

Dekarboxylácia lyzínu

Skúmavky by sa mali odčítavať po uplynutí 24 hodín inkubácie, inak hrozí riziko chybnej interpretácie reakcie, pričom sa uvedú falošné negatívy..

Je potrebné pripomenúť, že prvá reakcia, ktorá sa objaví, bude fermentácia glukózy, preto všetky skúmavky po 10 až 12 hodinách budú žltnúť..

Ak sa na konci inkubačnej doby (24 hodín) pozoruje žlté pozadie s fialovým alebo fialovým povrchom, reakcia je negatívna. Fialové sfarbenie povrchu zodpovedá alkalizácii média použitím peptonov.

Pozitívna reakcia je reakcia, pri ktorej sú dno a povrch trubice úplne fialové, to znamená, že sa vracia do pôvodnej farby.

Preto, kto určuje pozitivitu testu je základ alebo dno média. Ak máte pochybnosti o farbe, môžete ju porovnať s neinokulovanou skúmavkou LIA.

Deaminácia lyzínu

Trubica, ktorá dokazuje deamináciu lyzínu, bude mať červenohnedý povrch a žlté pozadie (kyselinu) alebo celú červenohnedú trubicu..

Táto reakcia sa interpretuje ako negatívna pre dekarboxyláciu lyzínu, ale pozitívna pre deamináciu lyzínu.

Táto reakcia je definovaná a interpretovaná v skosení.

Výroba sírovodíka (H. \ T2S)

Pozitívna reakcia je pozorovaná výskytom čiernej zrazeniny v celom médiu alebo v jeho časti. Všeobecne medzi hranou skosenia a základňou.

Ak sa zrazenina vyskytuje v skúmavke, nevykazuje iné reakcie, ktoré sa vyskytujú v médiu.

Záznam výsledkov

Pri interpretácii testu sa výsledky zaznamenajú takto:

Najprv si prečítajte skosenie, potom dno alebo taco, potom výrobu H2S, a nakoniec výroba plynu.

Príklad: K / A + (-). To znamená:

  • K: Alkalický rám (fialový)
  • A: Kyslé (žlté) pozadie, to znamená negatívna dekarboxylačná reakcia a negatívna deaminácia.
  • +: Výroba sírovodíka
  • (-): Bez plynu.

príprava

Navážte 35 g lyzínového agaru dehydratovaného železa a rozpustite v jednom litri destilovanej vody.

Zahrievajte, kým sa agar úplne nerozpustí, a potom ho pomaly varte jednu minútu. Rozdeľte 4 ml média v 13/100 skúmavkách s bavlneným viečkom.

Sterilizujte v autokláve pri 121 ° C počas 15 minút. Vyberte z autoklávu a nechajte ho nakloniť šikmo tak, aby bola hlboká základňa a krátke skosenie..

Uchovávajte v chladničke pri teplote 2-8 ° C. Pred vysadením bakteriálneho kmeňa sa nechá temperovať.

Farba dehydratovaného média je béžová a médium pripravené načervenale purpurovej farby.

Konečné pH pripraveného média je 6,7 ± 0,2.

Médium sa zmení na žltú s pH rovným alebo menším ako 5,2 a purpurové pri pH 6,5.

aplikácie

Tento test sa spolu s ďalšími biochemickými testami používa na identifikáciu bacilov z čeľade Enterobacteriaceae..

Médium sa zaseje rovnou slučkou alebo ihlou, na dno skúmavky sa zhotoví jedna alebo dve raznice a potom sa povrch média kľukato zaberá..

Inkubuje sa 24 hodín pri 35-37 ° C v aerobióze. V prípade potreby sa nechá inkubovať ďalších 24 hodín.

Je užitočná hlavne na rozlíšenie druhov negatívnej citrónovej laktózy od Salmonellas sp.

referencie

  1. Mac Faddin J. (2003). Biochemické testy na identifikáciu klinicky významných baktérií. 3. vydanie. Redakčná Panamericana. Buenos Aires Argentína.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologická diagnostika Bailey & Scott. 12 ed. Redakcia Panamericana S.A. Argentína.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. 5. vydanie. Redakcia Panamericana S.A. Argentína.
  4. Laboratories Britania. Agar lyzínového železa. 2015. K dispozícii na adrese: britanialab.com
  5. BD Laboratories Agarové šikmé šarže BBL Lysine Iron. 2007. K dispozícii na adrese: bd.com
  6. Valtek Laboratories Médium L.I.A. 2009. Dostupné na: andinamedica.com