Nadácia Agar Hektoen, príprava a použitie



Hektoen agar alebo enterický Hektoen agar je pevné, selektívne a diferenčné kultivačné médium. Bol vytvorený v Hektoen Institute od King and Metzger na izoláciu enteropatogénnych baktérií rodov Shigella a Salmonella..

Médium je tvorené proteózovým peptidom, kvasinkovým extraktom, žlčovými soľami, laktózou, sacharózou, salicínom, tiosíranom sodným, chloridom sodným, citranom železitým, citranom amónnym, bromothymolovou modrou, kyselinou fuchsínom a agarom. Táto formulácia umožňuje rozlíšiť rody Shigella a Salmonella od zvyšku baktérií schopných rásť v tomto médiu.

Hoci existujú aj iné prostriedky s rovnakou funkciou ako Hektoenov agar, predstavuje to väčšiu výhodu v porovnaní s inými prostriedkami, najmä ak chcete obnoviť druhy Shigella.

Druhy oboch rodov spôsobujú u ľudí ťažké gastrointestinálne problémy v dôsledku konzumácie kontaminovaných potravín; prenos je teda fekálne - orálny. Preto je použitie agaru Hektoen indikované hlavne v mikrobiologickej analýze vzoriek stolice a potravín..

index

  • 1 Nadácia
  • 2 Príprava
  • 3 Použite
  • 4 Kontrola kvality
  • 5 Obmedzenia
  • 6 Referencie

nadácie

Hektoen agar obsahuje ako zdroj živín peptony a kvasinkový extrakt, ktorý poskytuje základné prvky pre mikrobiálny vývoj..

Má však tiež žlčové soli, ktoré pôsobia inhibíciou rastu niektorých baktérií, najmä grampozitívnych a niektorých gramnegatívnych. Z tohto dôvodu sa považuje za selektívne médium.

Na druhej strane, Hektoen agar je diferenčné médium. Táto vlastnosť je daná prítomnosťou fermentovateľných uhľovodíkov, ako je laktóza, sacharóza a salicín, spolu so systémom indikátorov pH, reprezentovaným brómtymolovou modrou a kyselinou fuchsínom..

Všetky baktérie schopné rastu v tomto médiu, ktoré nepatrí do rodu Salmonella a Shigella, vyvinú lososové alebo pomarančové kolónie s výnimkou rodu Proteus. Je to spôsobené fermentáciou jedného alebo viacerých prítomných sacharidov, ktoré okyslia médium, čo spôsobuje, že sa indikátor pH otáča.

Rod Shigella a Salmonella nie sú schopní kvasiť na niektorý z prítomných sacharidov, pričom používajú iba peptony ako zdroj energie, ktorý alkalizuje životné prostredie, a preto sú jeho kolónie modrozelené.

Aj v tomto médiu sa dajú rozlíšiť baktérie schopné tvoriť sírovodík (bezfarebný plyn). Tiosíran sodný pôsobí ako zdroj síry, zatiaľ čo citrát železa je odhaľujúcim činidlom. Obidve zlúčeniny umožňujú tvorbu čiernej zrazeniny sulfidu železa, ktorá je dôkazom reakcie.

Čierna zrazenina v strede kolónie s priehľadným halo okolo poskytuje vzhľad rybieho oka. Táto vlastnosť naznačuje prítomnosť rodu Salmonella.

Napokon, chlorid sodný udržuje osmotickú rovnováhu a agar dáva médiu pevnú konzistenciu.

príprava

Navážte 76 g dehydratovaného média a rozpustite v jednom litri destilovanej vody. Zmes sa intenzívne pretrepe a potom sa nechá 10 až 15 minút. Môže sa ohrievať a variť, čo umožňuje rotačné pohyby až do úplného rozpustenia. Toto médium nie je autoklávované.

Keď médium dosiahne teplotu približne 45 ° C, objem 20 ml sa priamo naleje do sterilných Petriho misiek..

Agar sa nechá stuhnúť. V tom čase sú pripravené na použitie. Odporúča sa okamžite použiť. Ak nie sú možné, mali by byť uchovávané v chladničke, kým sa nepoužijú.

Platne by mali byť odstránené čoskoro z chladničky pred výsadbou, aby sa teplota v miestnosti.

Hodnota pH média by mala byť 7,5 ± 0,2. Farba dehydrovaného média je fialová a pripravená je hnedasto zelená.

použitie

Použitie agaru Hektoen sa odporúča na vyhľadávanie baktérií rodu Shigella a Salmonella vo vzorkách stolice a potravín..

Možnosť izolácie týchto baktérií je značne zvýšená, ak je vzorka predtým obohatená o špeciálne bujóny, ako je napríklad seleničitanová živná pôda, selenitová cystínová živná pôda, tetratiónový bujón atď..

Očkovacia látka musí byť silná a očkovanie sa uskutoční striaciou. Platne sa inkubujú pri 37 ° C počas 24 až 48 hodín v aerobióze.

Inkubácia sa odporúča 48 hodín, pretože charakteristiky kolónií sú v tomto čase jasnejšie pre ich interpretáciu a diferenciáciu.

Kontrola kvality

Na vykonanie kontroly kvality na tomto médiu sa používajú certifikované bakteriálne kmene, ako napríklad: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Shigella flexneri ATCC 12022 a Shigella sonnei ATCC 25931.

Očakávané výsledky sú nasledovné: Salmonella typhimurium a  Salmonella enteritidis musia vypestovať zeleno-modré kolónie s čiernym stredom alebo bez neho. Kým druhy Shigella budú rásť ako modrozelené kolónie.

Môžete tiež zahrnúť kmene Escherichia coli ATCC 29212, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 a Staphylococcus aureus ATCC 25923.

V týchto prípadoch sú pozorované charakteristiky nasledovné: \ t E. coli a K. pneumoniae V tomto médiu sa vyvinú lososovo-oranžové kolónie, pričom okolo nich sa nachádza zrazenina rovnakej farby. Proteus bude vyvíjať modrozelené kolónie s čiernym centrom alebo bez neho.

zatiaľ čo S. aureus a  E. faecalis niekedy by sa mala inhibovať E. faecalis sa podarí rásť ako žlté kolónie, veľmi malé.

Na druhej strane, pretože toto médium nie je sterilizované v autokláve, je dôležité vyhodnotiť sterilitu média. Každá pripravená dávka by sa preto mala inkubovať jednu až dve platne bez inokulácie pri 37 ° C počas 24 hodín v aerobióze.

Očividne sa očakáva, že na doske nie je žiadny rast.

obmedzenia

-Proteusové druhy sa môžu vyvinúť v tomto prostredí a vlastnosti ich kolónií sa môžu zamieňať s druhmi Salmonella alebo Shigella. Z tohto dôvodu musí byť každá podozrivá kolónia potvrdená biochemickými testami.

-Použitie tohto média je potrebné sprevádzať inými menej selektívnymi agarmi, pretože ak sa požadovaný mikroorganizmus nachádza v nízkych koncentráciách, nemusí sa v tomto médiu vyvíjať..

-Počas prípravy sa neprehrievajte, pretože nadmerné teplo mení zloženie média.

-Neobvykle sa môžu objaviť kolónie Salmonella, ktoré fermentujú laktózu.

referencie

  1. Prispievatelia Wikipédie. Hektoenový enterický agar. Wikipédia, Voľná ​​encyklopédia. 13. marec 2019, 23:38 UTC. Dostupné na adrese: .wikipedia.org / Accessed 16. marca 2019.
  2. BD Laboratories BD Hektoen Enterický agar (HE agar). 2013. K dispozícii na adrese: bd.com
  3. Laboratories Britania. Hektoen Enterický agar. 2015. K dispozícii na adrese: britanialab.com
  4. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. Agar Hektoen agar. K dispozícii na adrese: f-soria.es
  5. Difco & BBL Manual, Hektoen Enteric Agar. 2. vydanie. K dispozícii na adrese: bd.com/europe