Nadácia Agar Endo, príprava a použitie



Endo agar alebo médium Endo je tuhé diferenčné kultivačné médium s určitým stupňom selektivity. Pôvodná receptúra ​​bola vytvorená firmou Endo v roku 1904 na rozlíšenie baktérií fermentujúcich laktózu od nefermentujúcich baktérií. Na začiatku bol navrhnutý na izoláciu Salmonella typhi, ale neskôr sa cieľ média obrátil na hľadanie koliformných baktérií.

Princíp endo agaru bol zachovaný, ale jeho zloženie prešlo v priebehu rokov nespočetnými zmenami. V súčasnosti sa médium skladá z tkanivového tkaniva štiepeného peptidom, laktózy, hydrogenfosforečnanu draselného, ​​siričitanu sodného, ​​bázického fuchsínu a agaru..

Hlavné použitie média bolo spojené s izoláciou a diferenciáciou gramnegatívnych bacilov patriacich do čeľade Enterobacteriaceae a ďalších blízkych rodín..

Dlhodobo sa používal pri odhaľovaní koliformných baktérií vo vode, mliečnych výrobkoch a potravinách, ale v súčasnosti je použitie tohto média nahradené inými podobnými funkciami. Niektoré mikrobiologické laboratóriá však tento agar používajú na izoláciu Enterobacteriaceae zo vzoriek klinického pôvodu.

index

  • 1 Nadácia
  • 2 Príprava
    • 2.1 Endo agar
    • 2.2 Variant agaru m-Endo
  • 3 Použite
  • 4 Kontrola kvality
  • 5 Obmedzenia
  • 6 Referencie

nadácie

Endo agar obsahuje peptony, ktoré slúžia ako zdroj aminokyselín, dusíka, uhlíka a energie, ktoré sú nevyhnutné pre rast nenáročných mikroorganizmov..

Na druhej strane, mierne selektívny charakter agaru je zabezpečený pridaním siričitanu sodného a bázického fuchsínu; obe zložky čiastočne alebo úplne inhibujú vývoj väčšiny grampozitívnych baktérií.

Diferenciálny charakter je daný prítomnosťou fermentovateľného sacharidu, ktorým je v tomto prípade laktóza a bázický fuchsín, ktorý tiež slúži ako indikátor pH.

Gramnegatívne baktérie, ktoré rastú na tomto agare a sú schopné fermentovať laktózu, budú tvoriť silné ružové kolónie; sú patognomické Escherichia coli tvorba tmavočervených kolónií so zeleným kovovým leskom. Je to spôsobené vysokou produkciou kyselín z fermentácie sacharidov.

Treba poznamenať, že médium, ktoré je okolo kolónií, sa tiež zmení na silnú ružovú farbu. Kým nefermentujúce gramnegatívne bacily laktózy tvoria svetloružové kolónie podobné stredne alebo bezfarebným.

Hydrogénfosforečnan draselný vyrovná pH média a agar je zložkou, ktorá poskytuje pevnú konzistenciu.

príprava

Endo Agar

Odváži sa 41,5 g dehydratovaného média a rozpustí sa v 1 litri destilovanej vody. Zmes sa zahrieva často miešaním až do úplného rozpustenia média. Sterilizujte v autokláve pri 121 ° C, pri tlaku 15 lb, počas 15 minút.

Keď sa vyberie z autoklávu, nechá sa vychladnúť na teplotu približne 45-50 ° C, zmes sa pred podávaním pretrepáva, aby sa homogenizovala. Nalejte 20 ml do sterilných Petriho misiek.

Pred uložením do chladničky nechajte platničky stuhnúť, invertovať a skladovať v krabici alebo zabaliť do tmavého papiera. Je veľmi dôležité chrániť pripravené médium pred priamym svetlom. Odporúčaná prax je pripraviť presné množstvo, ktoré bude potrebné.

Ak sa uchovávajú v chladničke, pred použitím sa dosky musia temperovať.

Hodnota pH média by mala byť medzi 7,2 až 7,6 a farba pripraveného média je svetloružová..

Variantný agar m-Endo

Existuje aj iná verzia agaru Endo (m-Endo), ktorý nasleduje vzorec McCarthyho, Delaneyho a Grassa, ktorý obsahuje viac zlúčenín a líši sa spôsobom prípravy..

Tento variant obsahuje: laktózu, triptosu, enzymatické štiepenie kazeínu, enzymatické štiepenie živočíšneho tkaniva, chlorid sodný, hydrogenfosforečnan draselný, siričitan sodný, kvasinkový extrakt, monobázický fosforečnan draselný, bázický fuchsín, deoxycholát sodný, laurylsulfát sodíka a agaru.

V tomto prípade vážime 51 g dehydratovaného média a suspendujeme v 1 litri destilovanej vody obsahujúcej 20 ml etanolu.

Počas miešania sa mierne zahrieva, kým sa médium úplne nerozpustí. Neprehrievajte a nesterilizujte v autokláve. Akonáhle je zmes homogénna, podávajte v sterilných Petriho miskách a nechajte stuhnúť.

použitie

V niektorých krajinách sa stále používa na počítanie totálnych a fekálnych koliformných baktérií vo vzorkách vody a potravín, najmä prítomnosť mikroorganizmov Escherichia coli ako hlavný ukazovateľ fekálnej kontaminácie.

Agar M-Endo odporúča Americká asociácia verejného zdravotníctva (APHA) na monitorovanie a kontrolu programov na dezinfekciu a čistenie odpadových vôd, ako aj na hodnotenie kvality pitnej vody..

Najpoužívanejšou metódou je membránová filtrácia po obohatení vzorky laurylsulfátovým bujónom na 2 až 4 hodiny.

Môže sa tiež použiť ako náhrada za agar EMB v mikrobiologickej analýze potravín a vody najpravdepodobnejšou technikou (NMP), konkrétne v kompletnej potvrdzujúcej fáze na potvrdenie prítomnosti \ t E. coli zo zakalených bujónov EC.

Kontrola kvality

Na vyhodnotenie kvality pripravenej šarže endo agaru sa zasia známe alebo certifikované kontrolné kmene.

Medzi kmeňmi, ktoré sa môžu použiť na tento účel, patria: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 11775, Enterobacter cloacae ATCC 13047, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella flexneri ATCC 12022, Proteus mirabilis ATCC 14153 a Enterococcus faecalis ATCC 11700.

Kmene sa vysiali vyčerpaním a inkubovali pri 37 ° C počas 24 hodín v aerobióze.

Očakávané výsledky sú:

  • na Escherichia coli: kolónie silné červené, s kovovým leskom.
  • na E. cloacae a K. pneumoniae kolónie by mali byť ružové mukoidy.
  • V prípade S. typhimurium, S. flexneri a P. mirabilis kolónie sú zvyčajne bledoružové alebo bezfarebné.
  • konečne, E. faecalis očakáva sa, že bude čiastočne inhibovaný, preto by jeho rast mal byť slabý s veľmi malými kolóniami silnej ružovej.

obmedzenia

-Médium Endo má nízku selektívnu silu, preto je možné, že niektoré grampozitívne mikroorganizmy ako Staphylococcus, Enterococcus a dokonca aj kvasinky môžu rásť..

-Na tomto médiu sa môžu vyvíjať aj iné bacily, ktoré nepatria do čeľade Enterobacteriaceae, ako napríklad Pseudomonas sp a Aeromonas sp. Charakteristiky týchto kmeňov sú bezfarebné nepravidelné kolónie.

-Pripravené médium je veľmi citlivé na svetlo, a preto jeho dlhodobé vystavenie zhoršuje indikátorový systém, ktorý nenávratne poškodzuje médium..

-Zložky média sa považujú za karcinogénne, preto sa treba vyhnúť priamemu kontaktu.

-Dehydratované médium je veľmi hygroskopické a uchováva sa v pôvodnom obale pri izbovej teplote, tesne uzavreté a v suchom prostredí..

referencie

  1. BD Laboratories Endo Agar. 2013. K dispozícii na adrese: bd.com
  2. Neogen Laboratories M Endo Agar. K dispozícii na adrese: foodsafety.neogen.com
  3. "Agar Endo." Wikipédia, slobodná encyklopédia. 7 sep 2017, 08:27 UTC. 28. február 2019, 22:55. Dostupné v: en.wikipedia.
  4. MercK laboratórium. Endo agar 2019. K dispozícii na adrese: merckmillipore.com
  5. Technický list laboratórií. M-End Agar LES. 2015. Dostupné na: liofilchem.net