Základ, príprava a použitie Agar EMB



EMB agar je selektívne a diferencované pevné kultivačné médium používané na izoláciu gramnegatívnych bacilov, hlavne čeľade Enterobacteriaceae, a iných nenáročných gramnegatívnych bacilov. Je tiež známa pod skratkou EAM, čo znamená eozín-metylénovú modrú.

Toto médium vytvoril Holt-Harris a Teague v roku 1916. Obsahuje peptón, laktózu, sacharózu, fosforečnan draselný, agar, eozín, metylénovú modrú a vodu. Je veľmi podobný Maccarkeyovmu agaru, najmä ak sa použije EMB agar modifikovaný Levinom, ktorý neobsahuje sacharózu.

V skutočnosti každé laboratórium rozhodne, či pracuje s jedným alebo druhým, pretože plní tú istú funkciu, aj keď sú biochemicky odlišné.

To dokonca predstavuje rovnakú nevýhodu ako klasický agar MacConkey, pokiaľ ide o produkciu rojenia rodom Proteus. Aby sa predišlo tomuto javu, môžete zvýšiť koncentráciu agaru až na 5%..

index

  • 1 Nadácia
    • 1.1 Selektívne
    • 1.2 Diferenciál
  • 2 Príprava
  • 3 Použitie
  • 4 Kontrola kvality
  • 5 Záverečné úvahy
  • 6 Referencie

nadácie

selektívne

Agar EMB je jemne selektívny, pretože obsahuje anilínové farbivá (eozín a metylénovú modrú), ktoré pôsobia ako inhibítory, zabraňujú rastu väčšiny grampozitívnych baktérií a niektorých náročných gramnegatívnych bacilov..

Tento agar má však tú nevýhodu, že niektoré grampozitívne baktérie môžu odolať prítomnosti inhibičných látok a rásť ako malé bezfarebné bodové kolónie, ako napr. Enterococcus faecalis a niektoré Staphylococcus.

Môžete tiež pestovať určité kvasinky, ako napr Komplex Candida albicans, Poskytne veľmi malé ružové kolónie. Z tejto kvasinky sa môžu vyvinúť aj chlamydospory, ak je vzorka zasiata do hĺbky.

diferenciál

Na druhej strane, agar EMB je tiež diferenciálnym médiom, pretože tieto farbivá spolu (eozín a metylénová modrá) majú schopnosť tvoriť zrazeninu pri kyslom pH, preto slúžia ako indikátory ich produkcie..

Slabo fermentujúce baktérie produkujúce laktózu alebo sacharózu produkujú purpurové kolónie za 24 až 48 hodín. Napríklad rody Klebsiella, Enterobacter a Serratia.

Tieto baktérie, ktoré silne fermentujú laktózu, ako napr Escherichia coli, alebo sacharóza Yersinia enterocolitica alebo Proteus penneri, vytvárajú zeleno-čiernu zrazeninu, ktorá u týchto druhov poskytuje charakteristiku kovového lesku.

Treba poznamenať, že ak sa používa EMB levine médium (bez sacharózy) \ t, Yersinia enterocolitica a Proteus penneri budú produkovať transparentné kolónie.

Baktérie, ktoré nefermentujú laktózu alebo sacharózu, sa živia prítomnosťou peptonov, ktoré poskytujú aminokyseliny a dusík potrebné na vývoj baktérií a produkujú transparentné kolónie. Napríklad rody Salmonella a Shigella.

Podobne je dôležité poznamenať, že rod Acinetobacter môže prezentovať kolónie levanduľovej modrej, aj keď to nie je fermentor laktózy, ani sacharóza, ale majú schopnosť fixovať metylénovú modrú v bunkovej stene. Môže k tomu dôjsť aj pri iných oxidačných baktériách.

príprava

Pôvodné dehydratované médium je svetlo béžové.

Na prípravu tohto kultivačného média by sa malo odvážiť 36 g dehydratovaného média a suspendovať v liekovke obsahujúcej jeden liter destilovanej vody..

Po 5 minútach ponechania zmesi v pokoji sa fiola prenesie do zdroja tepla, intenzívne a neustále sa mieša, až sa varí a úplne sa rozpustí..

Následne musí byť rozpustené kultivačné médium sterilizované pomocou autoklávu pri 121 ° C počas 15 minút.

Na konci času sa vyberie z autoklávu a nechá sa krátko odpočívať. Potom sa podáva v horúcej (45 - 50 ° C) 15 až 20 ml agaru v každej sterilnej Petriho miske. Médium by malo byť modré lakmus.

Po podaní sa doštičky nechajú mierne odkryté, kým sa agar trochu nevychladí. Potom sa zakryjú a nechajú úplne stuhnúť. Neskôr sa objednajú v držiaku s obráteným plakom a skladujú sa v chladničke (8 ° C) až do použitia.

Tento postup sa výhodne uskutočňuje v laminárnom prietokovom kryte alebo pred horákom Bunsen, aby sa zabránilo kontaminácii.

Je dôležité mať na pamäti, že každý obchodný dom uvedie množstvo, ktoré sa má odvážiť na prípravu kultivačného média.

Konečné pH média by malo byť 7,2 ± 0,2

aplikácie

Toto médium sa používa na siatie moču a výkalov alebo akéhokoľvek typu klinických vzoriek, najmä ak je podozrenie na prítomnosť nenáročných gramnegatívnych bacilov, ako sú bacily patriace do čeľade Enterobacteriaceae, ktoré v tomto médiu veľmi dobre rastú..

Enteropatogénne baktérie rodov Shigella a Salmonella sa vyznačujú bezfarebnými alebo mierne jantárovými kolóniami..

Rastú aj iné nefermentujúce laktózové bacily, ako napríklad Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter..

Podobne je toto médium veľmi užitočné pri mikrobiologickej analýze potravy a vody, pretože je ideálne pre úplnú potvrdzujúcu fázu stanovenia koliformných baktérií, to znamená potvrdiť prítomnosť E. coli z zakalených bujónov ES z najpravdepodobnejšej techniky počtu (NMP).

Kontrola kvality

Aby sa overilo, že novo kultivované kultivačné médium funguje dobre, kontrolné kmene sa môžu zasadiť, aby sa pozorovali charakteristiky kolónií a overilo sa, či dávajú podľa očakávania..

Pre tieto kmene ATCC alebo dobre identifikované kmene E. coli, Enterobacter aerogenes, Klebsiella sp, Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Pseudomonas aeruginosa a niektoré grampozitívne baktérie S. aureus.

Očakáva sa, že E. coli Vytvorte dobre vyvinuté modrasté čierne kolónie so zeleným kovovým leskom. Tak dlho ako, Enterobacter aerogenes a Klebsiella sp musia dávať dobre vyvinuté sliznice modro-čiernej.

Z jeho strany, Salmonella typhimurium a Shigella flexneri, musia vyvinúť veľké kolónie, bezfarebné alebo s miernou jantárovou farbou.

Konečne žáner Pseudomonas aeruginosa rastie ako bezfarebné kolónie nepravidelnej veľkosti, zatiaľ čo grampozitívne baktérie by mali byť úplne inhibované alebo rástli s veľmi malými kolóniami.

Záverečné úvahy

Niekedy sterilizácia spôsobí zníženie metylénovej modrej a pozorovanie oranžového média. Aby sa metylénová modrá oxidovala a aby sa obnovila fialová farba, musí sa jemne miešať, kým sa farba neobnoví.

Po sterilizácii sa môže farbivo vyzrážať, takže sa musí dobre premiešať pred podávaním Petriho misiek.

referencie

  1. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B a Velázquez O. 2009. Techniky mikrobiologickej analýzy potravín. 2. vydanie. Fakulta chemická, UNAM. Mexiko.
  2. Carranza C, León R, Falcón N, Neumann A, Kromm C. Charakterizácia a distribúcia kmeňov \ t Escherichia coli Potenciálne patogénne izoláty kuracích brojlerov z hydinových fariem v Peru. Rev. vet. Peru 2012 23 (2): 209-219. K dispozícii na: scielo.org.
  3. Laboratories Conda S.A. Eozínový agar a metylénová modrá. 2010. K dispozícii na adrese: condalab.com
  4. Laboratories Britania. Levine E.M.B (S Eozínom a metylénovou modrou) 2011. K dispozícii na: britanialab.com
  5. BD Laboratories Agar BD EMB (Eosin Methylene Blue Agar), modifikovaný. 2013. K dispozícii na adrese: bd.com
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. (5. vydanie). Argentina, Editorial Panamericana S.A..
  7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Mikrobiologická diagnostika Bailey & Scott. 12 ed. Argentína. Panamericana S.A Editorial