Agar CLED nadácia, použitie a príprava



CLED agar (Cystine-Lactose-Electrolytes-Deficient) je diferenciálne pevné kultivačné médium, ktoré sa používa na diagnostiku infekcií močových ciest. Zloženie kultivačného média je určené na dobrý rast močových patogénov a je ideálne na kvantifikáciu jednotiek tvoriacich kolónie (CFU)..

Kultivačné médium CLED je neselektívne, pretože v ňom môžu rásť gramnegatívne a tiež grampozitívne mikroorganizmy. Ale to nie je problém, pretože väčšina infekcií močových ciest je spôsobená jedným typom mikroorganizmu.

V prípade polymikrobiálnych infekcií možno získať 2 alebo 3 rôzne baktérie, ale je to veľmi zriedkavé a vo väčšine prípadov sú kontaminované vzorky..

Medzi gramnegatívne baktérie, ktoré môžu rásť v tomto médiu, patria bacily patriace do rodiny Enterobacteriaceae a iné enterické bacily, pričom uropatogény sa najčastejšie izolujú vo vzorkách moču: \ t Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Morganella morganii, Pseudomonas aeruginosa, medzi inými.

Podobne, medzi Gram-pozitívnymi baktériami, ktoré môžu rásť v tomto médiu Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus, Enterococcus faecalis, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium sp, Lactobacillus sp a môžu dokonca pestovať kvasinky, ako je komplex Candida albicans.

Vzhľadom na chemické zloženie média však neumožňuje rast niektorých náročných genitourinárnych patogénov, ako sú napr Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella vaginalis, medzi inými.

index

  • 1 Založenie CLED agaru
  • 2 Založenie agaru CLED (Bevis)
  • 3 Použitie
    • 3.1 Siatie vzoriek moču
    • 3.2 Interpretácia
    • 3.3 Identifikácia
  • 4 Príprava
  • 5 Referencie

Založenie CLED agaru

Kultivačné médium CLED má ako zdroj energie mäsový extrakt, kazeínový pankreatický hydrolyzát a želatínový hydrolyzát. Poskytujú živiny pre rozvoj nenáročných baktérií.

Obsahuje tiež cystín, aminokyselinu, ktorá umožňuje rast koliformných baktérií, ktoré sa dajú rozlíšiť malou veľkosťou.

Podobne, laktóza obsahuje fermentovateľné sacharidy, preto je toto médium diferenciálne; schopnosť rozlíšiť fermentujúce baktérie od nefermentujúcej laktózy.

Kvasenie baktérie otočiť, aby sa pH výroby kyseliny pre rozvoj žlté kolónie, zatiaľ čo nefermentujúce baktérie negenerujú zmeny prostredia a tým posúva farbu pôvodného agaru, zelená.

Fermentačná reakcia je odhalená vďaka prítomnosti pH indikátora, ktorý je v tomto médiu brómtymolová modrá.

Na druhej strane nízka koncentrácia elektrolytu v médiu inhibuje typický invazívny rast rodu Proteus, nazývaný efekt rojenia. To vytvára výhodu, pokiaľ ide o iné prostriedky, pretože umožňuje počítanie UFC vrátane toho, či je prítomný rod Proteus..

Nízka koncentrácia elektrolytov však inhibuje rast niektorých druhov rodu Shigella, je to nevýhoda vzhľadom na iné prostriedky.

Základ agaru CLED (Bevis)

Existuje variant alebo modifikácia tohto média vyrobeného Bevisom, ktorý včlenil pôvodné zloženie kyseliny fuchsínovej (indikátor Andrade) do pôvodnej kompozície. Pôsobí spolu s brómtymolovou modrou na diferenciáciu fermentácie z nefermentujúcich baktérií.

Rozdiel medzi konvenčným spôsobom a modifikovaným farby prijíma kolónie. V prípade fermentácie laktózy baktérií, kolónie vyvinúť červenkasté oranžovej s ružovým alebo červený kruh, pričom nefermentujúce sú modrasto sivú.

aplikácie

Aged CLED sa používa výhradne na siatie vzoriek moču. Použitie tohto média je obzvlášť časté v európskych laboratóriách, zatiaľ čo v Amerike je menej využívané.

Zber vzorky musí spĺňať určité parametre, aby sa dosiahli spoľahlivé výsledky, vrátane: \ t

  • Neužívajte antibiotiká pred odobratím vzorky.
  • Moču užívať prednostne od prvej hodiny ráno, pretože je koncentrovanejšia, keď nie je možné odoberať vzorky invazívnymi metódami..
  • Pred odobratím vzorky genitálie dôkladne umyte.
  • Zlikvidujte prvý prúd močenia a potom umiestnite nádobu.
  • Odoberte medzi 25 až 30 ml moču v sterilne označených nádobách.
  • Vezmite okamžite do laboratória obklopeného ľadom.
  • Musí sa spracovať pred 2 hodinami emisií alebo chladiť na 4 ° C maximálne 24 hodín.

Výsev vzoriek moču

Vzorka moču sa musí zriediť 1:50.

Na zriedenie umiestnite 0,5 ml moču pacienta a zrieďte 24,5 ml sterilného fyziologického roztoku.

Odmerajte 0,1 ml nariedeného moču a na povrchu CLE zasiaďte drigalským špachtľou. Toto je spôsob naočkovania, ktorý je určený na počítanie kolónií. Preto sa používa vo vzorkách moču, pretože výsledky sa musia vyjadriť v CFU / ml.

Pre kvantifikáciu týchto kolónií, postupuje sa takto: počet kolónie a vynásobiť dosky 10 a potom 50. Táto získa počet CFU / ml moču.

interpretácia

Počítanie nad 100 000 CFU / ml - Indická infekcia moču

Počítanie pod 1000 CFU / ml - bez infekcie

Počítanie medzi 1000 - 10 000 CFU / ml - pochybná, možná kontaminácia, opakovanie odoberania vzoriek.

identifikácia

Kolónie pestované na agare CLED by sa mali pripraviť na gram a v závislosti od morfotypeintívnych vlastností mikroorganizmu sa vykoná určitá subkultúra..

Napríklad, ak sa jedná o gramnegatívny bacil, bude zasiaty na agar MacConkey, kde je potvrdená fermentácia alebo nie laktózy. Okrem toho sa na vykonanie oxidázového testu pripojí výživný agar.

V prípade, že Gram odhalí grampozitívne koky, môže sa subkultivovať v slanom manitolovom agare a v nutričnom agare. V druhom sa vykoná katalázový test. Nakoniec, ak sú pozorované kvasinky, bude zasiate na Sabouraudovom agare.

Mnohé laboratóriá sa vyhýbajú použitiu média CLED a uprednostňujú len použitie krvného agaru, MacConkey a výživného agaru na siatie vzoriek moču..

príprava

V injekčnej liekovke s jedným litrom destilovanej vody sa rozpustí 36,2 g práškového CLED agaru. Po 5 minútach odpočinku sa zahrievaný agar zahreje a mieša sa až do varu 1 minútu.

Potom sa sterilizuje pri teplote 121 ° C počas 15 minút v autokláve. Akonáhle je čas ukončený, je z autoklávu odstránený a ponechaný vychladnúť až do dosiahnutia teploty 45 ° C. Následne sa podávalo v každej sterilnej Petriho miske medzi 15 - 20 ml.

Postup pre podávanie platní sa musí vykonať vo vnútri laminárneho prúdenia vzduchu alebo pred horákom Bunsen, aby sa zabránilo kontaminácii.

Podávané misky sa nechajú stuhnúť, objednajú sa v držiaku platní prevrátenom a uchovávajú sa v chladničke (2 - 8 ° C) až do použitia..

Konečné pH pripraveného média by malo byť 7,3 ± 0,2.

referencie

  1. Odporúčania pre mikrobiologickú diagnostiku infekcie močových ciest. Chil. infectol.  2001; 18 (1): 57-63. K dispozícii na: scielo.org.
  2. Panchi J. Identifikácia mikrobiálneho činidla spôsobujúceho močové infekcie u interných pacientov podstupujúcich katetrizáciu močového mechúra. 2016. Bakalárske práce požiadať o titul v licenčnom laboratóriu. Technická univerzita v Ambato. Ekvádor.
  3. Laboratories Britania. Polovica CLED. K dispozícii na adrese: britanialab.com.
  4. Renylab Laboratories Návod na použitie, CLED Agar. 2013 Dostupné na: www.renylab.ind.br.
  5. Kultivované laboratóriá Základný manuál mikrobiológie. Dostupné na: ictsl.net.
  6. Muñoz P, Cercenado E, Rodríguez-Créixems M, MD Díaz, Vicente T, Bouza E. Možnosť agaru CLED v rutine kultivácie moču. Perspektívne a komparatívne hodnotenie. Diagnostický Microbiol Infect Dis. 1992; 15 (4): 287-90.
  7. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktická klinická mikrobiológia. Univerzita v Cadiz, 2. vydanie. UCA Publications Service.