Simmons citrát agar nadácie, príprava a použitie



Simmons citrát agar Je to pevné médium používané ako biochemický test na identifikáciu mikroorganizmov, najmä gramnegatívnych bacilov. Pôvodné médium vytvoril Koser v roku 1923.

Koserovo citrátové médium sa skladalo z bujónu obsahujúceho fosforečnan sodný, fosforečnan amónny, fosforečnan draselný, síran horečnatý a citrát sodný..

Ako je možné vidieť, jediným zdrojom uhlíka v médiu je citrát a dusík je fosforečnan amónny, proteíny a sacharidy, ktoré sú vynechané ako zdroj týchto prvkov, sú bežne prítomné v iných médiách..

Preto sa baktéria inokulovaná v tomto médiu môže reprodukovať len vtedy, ak je schopná odobrať citrátový uhlík. Test bol pozitívny, ak sa v médiu vyskytla turbidita, avšak mala tú nevýhodu, že sa mohla vyskytnúť nešpecifická turbidita.

Tento problém bol vyriešený Simmonsom pridaním agaru a brómtymolovej modrej do pôvodnej receptúry Kosera. Hoci princíp je rovnaký, vykladá sa odlišne.

index

  • 1 Nadácia
    • 1.1 Režim výsevu
    • 1.2 Interpretácia
  • 2 Príprava
  • 3 Použite
  • 4 Záverečné úvahy
    • 4.1 Inokulum
    • 4.2 Nasadenie
    • 4.3 Intenzita farby
  • 5 Referencie

nadácie

Niektoré baktérie majú schopnosť prežiť v neprítomnosti fermentácie alebo produkcie kyseliny mliečnej, ktorá potrebuje získať energiu prostredníctvom použitia iných substrátov. V tomto teste je jediným zdrojom uhlíka citrát.

Baktérie, ktoré sú schopné prežiť za týchto podmienok, rýchlo metabolizujú citrát prostredníctvom alternatívy k tradičnej ceste, pričom sa použije cyklus trikarboxylovej kyseliny alebo citrátový fermentačný cyklus..

Katabolizmus citrátu baktériami obsahuje enzymatický mechanizmus bez zásahu koenzýmu A. Tento enzým je známy ako citricase (citrát oxaloacetát-lyáza) alebo citrát desmolase. Reakcia vyžaduje prítomnosť dvojmocného katiónu, ktorý je v tomto prípade dodávaný horčíkom.

Reakcia vytvára oxaloacetát a pyruvát, ktoré potom vytvárajú organické kyseliny uprostred alkalického pH vytvoreného použitím zdroja dusíka. Tieto organické kyseliny sa používajú ako zdroj uhlíka, ktorý vytvára uhličitany a hydrogenuhličitany a ďalej alkalizuje médium.

Režim výsevu

Simmonsovo citrátové médium by sa malo ľahko naočkovať do chvosta rýb pomocou rovnej slučky alebo ihly a inkubovať 24 hodín pri 35-37 ° C. Na konci času sú výsledky pozorované.

Očkovanie sa vykonáva len na povrchu agaru. Nevykonávajte prepichnutie.

interpretácia

Ak má médium pôvodnú farbu (zelená) a nie je viditeľný rast, test je negatívny, ale ak sa médium zmení na modré, znamená to prítomnosť alkalických produktov, ktoré sa detegujú indikátorom pH. V tomto prípade je test pozitívny.

To sa deje preto, že ak baktéria používa uhlík citrátu, je tiež schopná odoberať dusík fosforečnanu amónneho, ktorým sa uvoľňuje amoniak, alkalizuje médium..

Na druhej strane, ak sa v médiu pozoruje rast baktérií, ale nedochádza k zmene farby, test by sa mal tiež považovať za pozitívny, pretože ak je rast, znamená to, že baktérie boli schopné používať citrát ako zdroj uhlíka, hoci v súčasnosti nie je zmena pH (niekedy to môže trvať).

Ak existujú pochybnosti o interpretácii konečnej farby, možno ju porovnať s skúmavkou neinokulovaného citrátu.

príprava

Odváži sa 24,2 g dehydratovaného média na jeden liter vody. Premiešajte a nechajte stáť približne 5 minút. Rozpúšťanie média sa ukončí zahrievaním počas 1 alebo 2 minút, pričom sa často mieša.

Podávajte 4 ml v skúmavkách a autoklávujte 15 minút pri 121 ° C. Pri opúšťaní autoklávu sa nakloní pomocou nosiča tak, aby agar stuhol vo forme píku s malou drážkou alebo dnom a skosením..

Konečné pH citrátového média je 6,9 ​​(zelené). Toto médium je veľmi citlivé na zmenu pH.

Pri pH 6 alebo nižšom sa médium zmení na žlté. Táto farba sa pri teste s baktériami nepozoruje.

Pri pH 7,6 alebo vyššom sa médium mení na intenzívnu pruskú modrú.

použitie

Simmonsov citrátový agar sa používa na identifikáciu určitých mikroorganizmov, najmä bacilík patriacich do čeľade Enterobacteriaceae a iných bacíl nefermentujúcich glukózu..

Záverečné úvahy

Simmons citrátové médium je veľmi chúlostivý test, pretože falošné pozitívne výsledky možno získať, ak sa urobia určité chyby.

Starostlivosť, ktorá sa musí venovať, je nasledovná:

očkovacie

Nevytvárajte veľmi hrubé alebo naložené bakteriálne inokulum, pretože to môže spôsobiť, že sa v mieste výsadby vyvinie meďnatá žltá farba bez toho, aby to ovplyvnilo zvyšok média, ale môže to viesť k presvedčeniu, že rast rastie. To isté neznamená pozitivitu testu.

Podobne, hrubé inokulum môže vytvoriť falošne pozitívne, pretože predformované organické zlúčeniny v bunkových stenách umierajúcich baktérií môžu uvoľniť dostatok uhlíka a dusíka na to, aby sa indikátor pH zmenil..

Preto je ideálne zasadiť pomocou ihly namiesto platinovej rukoväte, aby sa zabránilo prebytku materiálu.

zasadený

Na druhej strane, keď sa na identifikáciu príslušného mikroorganizmu zasadí batéria biochemických testov, je dôležité, aby sa citrátový test naočkoval ako prvý, aby sa zabránilo ťahaniu proteínov alebo sacharidov z iného média..

Za týchto okolností je možné získať falošne pozitívny výsledok, pretože každá z týchto látok, ktoré sa zaviedli omylom, sa metabolizuje a spôsobí zmenu pH..

Ďalším spôsobom, ako sa vyhnúť úniku látok, je dobre spáliť rukoväť a odobrať nové inokulum medzi jeden test a ďalšie.

Pozornosť by sa mala venovať aj pri dotyku kolónie, aby sa vykonalo inokulum, pretože je potrebné vyhnúť sa tomu, aby sa časť agaru pretiahla z kultúry, z ktorej baktérie pochádzajú, a to z dôvodu skôr vysvetlených.

V tomto zmysle Matsen, Sherris a Branson odporúčajú riedenie inokula vo fyziologickom roztoku pred inokuláciou citrátového testu, aby sa zabránilo prenosu iných zdrojov uhlíka..

Intenzita farby

Je potrebné vziať do úvahy, že intenzita farby vytvorenej pri pozitívnom teste sa môže líšiť v závislosti od komerčného domu.

Okrem toho existujú mikroorganizmy, ktoré sú testované pozitívne po 24 hodinách, ale existujú aj iné kmene, ktoré vyžadujú 48 hodín alebo viac na vyvolanie zmeny pH.

referencie

  1. Mac Faddin J. (2003). Biochemické testy na identifikáciu klinicky významných baktérií. 3. vydanie. Redakčná Panamericana. Buenos Aires Argentína.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologická diagnostika Bailey & Scott. 12 ed. Redakcia Panamericana S.A. Argentína.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. 5. vydanie. Redakcia Panamericana S.A. Argentína.
  4. BD Laboratories BBL Simmons Citrát Agar šikmé. 2015. K dispozícii na adrese: bd.com
  5. Laboratories Britania. Simmons Citrát Agar. 2015. K dispozícii na adrese: britanialab.com
  6. Valtek Diagnostic Laboratories. Simmons Citrát Agar. 2016. Dostupné na: andinamedica.com.