Agar čokoládový základ, použitie a príprava



čokoládový agar je to pevné, obohatené, neselektívne a nediferenčné kultivačné médium. Používa sa hlavne na izoláciu mikroorganizmov náročných z hľadiska výživy, hoci môže rásť akýkoľvek druh baktérií..

To je dôvod, prečo sa jeho užitočnosť zvyšuje najmä pri naočkovaní vzoriek, ktoré sú normálne sterilné, ako je CSF a kĺbová tekutina. Aj keď je tiež zahrnutý do prostriedkov vybraných na siatie polymikrobiálnych vzoriek, ale v týchto prípadoch je potrebné pridať antibiotiká, ktoré inhibujú sprievodnú flóru..

Toto médium má charakteristickú hnedú farbu veľmi podobnú čokoláde, teda jej názov. Prípravok je veľmi podobný krvnému agaru, len v tomto prípade sa musí krv zohriať, aby sa červené krvinky zlomili.

Jeho príprava, ako krvný agar, je veľmi jemná, pretože je ľahko kontaminovaná. Z tohto dôvodu mnohé laboratóriá uprednostňujú toto médium už pripravené komerčnými domami, ktoré zaručujú ich kvalitu.

index

  • 1 Nadácia
  • 2 Použitie
    • 2.1 Čokoládový agar pripravený s agarom Columbia
    • 2.2 Čokoládový agar pripravený s agarom GC bázy (pre gonokoky) \ t
    • 2.3 Čokoládový agar pripravený s agarom Müeller Hinton
    • 2.4 Čokoládový agar pripravený s agarom Thayer Martin
  • 3 Príprava
    • 3.1 Výpočty
    • 3.2. Odvážte a rozpustite
    • 3.3 Sterilizácia
    • 3.4 Agregácia krvi
    • 3.5 Ďalší spôsob prípravy čokoládového agaru bez použitia krvi
  • 4 Kontrola kvality
  • 5 Referencie

nadácie

Toto médium sa skladá z bázy agaru bohatého na živiny a zohriatej krvi. Hemolýza červených krviniek poskytuje faktor X (hemín) a faktor V (NAD), ktoré sú nevyhnutné na rast niektorých mikroorganizmov, ako je napríklad rod. Haemophilus. Je tiež veľmi užitočná pre izoláciu Neisserias sp.

Podobne ako krvný agar, môžu byť použité rôzne médiá ako základný agar v závislosti od potreby. Medzi použitými médiami patrí infúzia mozgového srdca a sójový agar s tryptikázou, hoci najviac odporúčané sú agar Columbia, Müeller Hinton, agar GC a agar Thayer Martin..

Niektoré varianty čokoládového agaru zahŕňajú komerčne dostupný obohatený doplnok nazvaný Isovitalex alebo Polivitex.

Tieto doplnky obsahujú vitamín B12, L-glutamín, adenín, hydrochlorid guanínu, kyselina p-aminobenzoová, nikotínamid adenín dinukleotid (NAD), pyrofosfát tiamínu, dusičnan železitý, hydrochlorid tiamínu, hydrochlorid cysteínu, L-cystín a glukóza.

Je dôležité poznamenať, že čokoládový agar je viac obohatený ako krvný agar, ale neumožňuje pozorovanie hemolytických modelov..

aplikácie

Čokoládový agar pripravený s agarom Columbia

Toto médium obsahuje kazeínový a srdcový pankreatický trávený, strávený mäsový peptid, chlorid sodný, agar, kvasinkový extrakt a kukuričný škrob. Je tiež bohatý na vitamíny, minerály a esenciálne aminokyseliny.

Táto báza s ohrievanou krvou je ideálna na izoláciu baktérií rodu Neisseria. Na druhej strane, ak sa k médiu pridá doplnok Brucella, môže sa izolovať uvedený mikroorganizmus. Výsledky sa zlepšili použitím konskej krvi.

Čokoládový agar pripravený s agarom GC bázy (pre gonokoky) \ t

Toto médium obsahuje peptony, kukuričný škrob, monobázické a dibázické pufre, chlorid sodný a agar.

Väčšina komerčne pripravených čokoládových agarových prezentácií prichádza s touto bázou a neobsahuje žiadnu zahriatu krv, ale syntetickú zmes hemínu a chemický doplnok rastových faktorov, vitamínov, minerálov, aminokyselín, faktora V a glukózy..

Čokoládový agar pripravený s agarom Müeller Hinton

Používa sa na testovanie antimikrobiálnej citlivosti náročných mikroorganizmov, ako napr Streptococcus pneumoniae použitím 5% zohriatej krvi.

Slúži tiež na primárnu izoláciu Neisserias a Haemophilus, ale v konkrétnom prípade izolácie \ t Haemophilus uprednostňuje sa používanie konskej krvi, pretože je bohatým zdrojom faktora X a V.

Na druhej strane, ak vzorka, ktorá sa má zasiať, pochádza z nesterilnej oblasti, odporúča sa pridanie antibiotík, aby sa inhibovala normálna flóra oblasti..

Príklad pre respiračné vzorky, kde je podozrenie na prítomnosť baktérií rodu Haemophilus Bacitracín sa používa na inhibíciu rastu Staphylococcus, Micrococcus, Streptococcus a Saprophytic Neisseria.

V prípade vzoriek genitálneho kanála, kde existuje podozrenie Haemophilus ducreyi, Úspešne sa použil čokoládový agar pripravený nasledujúcim spôsobom: agar Müeller-Hinton s 5% chokolatizovanej konskej krvi, 1% obohatenie Isovitalexom a 3 μg / ml vankomycínu.

Čokoládový agar pripravený s agarom Thayer Martin

Toto médium je špeciálne pre izoláciu Neisseria gonorrhoeae. Musí obsahovať antibiotiká na inhibíciu sprievodnej flóry. Používa sa jahňacia krv.

príprava

Mali by sa vidieť indikácie na prípravu základného agaru, ktorý sa má použiť. Sú na zadnej strane obalu dehydratovaného média. Zvyčajne opisujú, koľko by sa malo odvážiť na prípravu jedného litra kultivačného média.

V laboratóriu si môžete pripraviť presné množstvo, môže byť viac alebo menej ako jeden liter.

výpočty

Pravidlo tri sa vykonáva na výpočet, koľko by sa malo zvážiť na prípravu požadovaného objemu. príklad:

Ak je pre 1 liter potrebné vážiť 40 g a laboratórium potrebuje 800 ml, hovorí sa:

1000 ml -40 g

800 ml - X

Vzorec bude nasledovný:

X = 32 gr (množstvo na váženie 800 ml).

Odvážte a rozpustite

Prídeme k váženiu potrebného množstva a umiestnime ho do fioly s vodou.

Zahrejte na miernom ohni a jemne premiešajte rotačnými pohybmi, kým sa dehydratované médium úplne nerozpustí a nechá sa variť 1 minútu..

sterilizovať

Fiola sa zavedie do autoklávu na sterilizáciu média pri 121 ° C počas 20 minút.

Agregát krvi

Pri opúšťaní autoklávu sa nechá zostať v pokoji, až kým teplota média nie je približne medzi 56 až 70 ° C, aby sa krv umiestnila do zmesi a miešala sa, až kým médium nezhnedlo..

Ak sa chystáte pridať doplnky, je čas to urobiť. Následne sa premieša a pridá sa 20 ml každej sterilnej Petriho misky.

Celý postup sa musí vykonať v digestore s laminárnym prúdením alebo okolo horáka Bunsen.

Nechajte stáť, kým nestuhnú a nezmiznú v chladničke.

Ďalší spôsob, ako pripraviť čokoládový agar bez použitia krvi

Základné médium sa pripraví ako je opísané vyššie, komerčne získaný dehydratovaný hemoglobín sa rozpustí a sterilizuje v autokláve..

Oba roztoky sa nechajú ochladiť na 50 ° C, spoja sa a pridá sa doplnok. Zmiešajte v aseptických podmienkach a potom podávajte v sterilných Petriho miskách.

Kontrola kvality

Je dôležité, aby sa krv umiestnila na uvedenú teplotu, pretože ideálne je lýzovať červené krvinky a zároveň udržiavať faktor V, ktorý je citlivý na teplo..

Na povrchu agaru nesmú byť žiadne bubliny. Každá šarža 100 platní sa inkubuje jednu alebo dve platne v peci pri teplote 37 ° C počas 24 hodín, aby sa skontrolovala ich sterilita.

Na dosiahnutie najlepších výsledkov je potrebné krátko po príprave použiť čokoládový agar.

Kontrolné bakteriálne kmene by sa mali odobrať v laboratóriu, aby sa vyhodnotila účinnosť čerstvo pripraveného média pre rast hlavných náročných mikroorganizmov klinicky významných..

referencie

  1. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktická klinická mikrobiológia. Univerzita v Cadiz, 2. vydanie. UCA Publications Service.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologická diagnostika Bailey & Scott. 12 ed. Argentína. Panamericana S.A Editorial.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. (5. vydanie). Argentina, Editorial Panamericana S.A..
  4. Llanes R, Reyes A, Rodríguez C, Guzmán D, Llop A. Možnosť použitia základného kultivačného média GC-Biocen Agar v mikrobiologickom laboratóriu. Rev Cubana Med Trop,  2004; 56 (3): 237-238. K dispozícii na: scielo.sld.
  5. Prispievatelia Wikipédie. Čokoládový agar. Wikipédia, Voľná ​​encyklopédia. 17. decembra 2018, 19:54 UTC. K dispozícii na adrese: en.wikipedia.org.