Cetrimida agarový základ, príprava, použitie



agar cetrimidu alebo cetrimid je selektívne pevné kultivačné médium určené na izoláciu Pseudomonas aeruginosa. Je založený na zvýraznení produkcie pigmentov charakteristických pre tento druh a bol vyvinutý z modifikácie Tech agaru, vytvoreného Kingom, Wardom a Raneyom..

Pôvodný vzorec obsahoval chlorid horečnatý, síran draselný, štiepenie pankreatickej želatíny a agar-agar. Modifikácia vzorca pozostávala z pridania cetrimidu (cetyltrimetylamóniumbromidu) a glycerolu.

Agar Cetrimidu je užitočný na mikrobiologické štúdie vzoriek, kde je prítomná Pseudomonas aeruginosa. Treba poznamenať, že táto baktéria má veľký význam, pretože hoci je súčasťou normálnej environmentálnej mikrobiózy, často sa chová ako oportúnny patogén..

Preto jedným z najčastejších problémov spôsobených týmto choroboplodným zárodkom sú nozokomiálne infekcie, to znamená tie, ktoré sa vyskytujú v nemocničnom prostredí a útočia na pacientov s depresívnym imunitným systémom..

Na druhej strane, vzhľadom na afinitu, ktorú tento mikroorganizmus má s vlhkosťou, najzraniteľnejšími cieľmi kontaminácie sú: asistované dýchacie prístroje, lieky, nebulizéry, vodné zdroje, klimatizačné zariadenia, dezinfekčné prostriedky, mydlové roztoky, injekčné roztoky, otvorené rany , katétre, močové katétre.

V tomto zmysle je cetrimidový agar vhodný na uskutočňovanie mikrobiologických kontrol a plodín k prvkom uvedeným vyššie.

index

  • 1 Nadácia
    • 1.1 Tlmočenie
  • 2 Príprava
  • 3 Použitie
  • 4 Nasadené
  • 5 Obmedzenia
  • 6 Kontrola kvality
  • 7 Referencie

nadácie

Agar Cetrimidu je založený na schopnosti média podporovať rast P. aeruginosa, stimulujú produkciu svojich pigmentov a následne inhibujú rast iných mikroorganizmov.

Tieto vlastnosti sú spôsobené funkciou, ktorú plní každá z jeho zložiek. Prítomný želatínový peptid slúži ako zdroj dusíka, vitamínov a minerálov. Glycerol alebo glycerín funguje ako zdroj uhlíka.

Cetrimid (cetyltrimetylamóniumbromid) je látka, ktorá inhibuje rast iných baktérií ako P. aeruginosa, vrátane iných druhov patriacich do rovnakého rodu.

Inhibícia nastáva, pretože cetramid pôsobí ako katiónový detergent, destabilizuje plazmatickú membránu väčšiny baktérií, s výnimkou P. aeruginosa a niektoré ďalšie, ktoré dokážu prežiť.

Na druhej strane obsahuje chlorid horečnatý a síran draselný. Tieto zlúčeniny stimulujú fenotypovú expresiu súvisiacu s kapacitou Pseudomonas aeruginosa na výrobu rôznych pigmentov, medzi ktoré patria: pyocyanín, pioverdin, piorubin, piomelanín a fluoresceín. Nakoniec obsahuje agar-agar, ktorý mu dodáva pevnú konzistenciu.

interpretácia

Interpretácia rastu získaného na tomto agare sa uskutočňuje nasledujúcim spôsobom:

Pozorovanie okrúhlych, hladkých kolónií s pravidelnými hranami, produkujúce modrozelené, zelené, hnedé alebo červenkasté pigmenty, plus emisia ovocnej vône (aminoacetofenón), je predpokladaným výsledkom prítomnosti tejto baktérie v uvedenej vzorke..

Na druhej strane je to indikatívne P. aeruginosa pozorovanie jasného žltozeleného pigmentu na kolóniách, keď je platňa vystavená ultrafialovému svetlu.

Je potrebné poznamenať, že každá pozorovaná farba je spôsobená produkciou špecifického pigmentu. Modrozelený pigment zodpovedá produkcii pyocyanínu, zelenej až pioverdínovej, červenkastej až piorrubínu, hnedej až piomelanínu a jasne žltozelenej fluorescencii v ultrafialovom svetle až fluoresceínu..

príprava

Navážte 43 g dehydratovaného média a rozpustite v destilovanej vode. Pridajte 10 ml glycerolu. Vezmite zmes do zdroja tepla. Nechajte variť niekoľko minút až do úplného rozpustenia.

Autoklávujte pri 121 ° C počas 15 minút. Nechajte stáť a podávajte v sterilných Petriho miskách, keď je teplota okolo 50 ° C.

Nechajte stuhnúť, invertovať, objednať v plaquers a skladovať v chladničke až do použitia. Na sadenie cetrimidových agarových platní by sa mali z chladničky odstrániť vopred a nechať ich odobrať izbovú teplotu..

Konečné pH média by malo byť 7,2 ± 0,2.

Farba dehydrovaného média je béžová a prípravok je nepriehľadný biely.

aplikácie

Agar Cetrimidu sa môže použiť na pestovanie všetkých typov vzoriek, v ktorých je prítomná prítomnosť Pseudomonas aeruginosa. Preto je užitočný vo všetkých oblastiach mikrobiológie (environmentálne, priemyselné, klinické, vodné a potravinové)..

Je veľmi dôležité analyzovať nemocničné prostredie, a teda byť schopný aplikovať nápravné mediácie, pretože tento mikroorganizmus sa dostáva k pacientom prostredníctvom zariadení, liekov, roztokov a kontaminovaných dodávok, ktoré pacient používa..

Týmto spôsobom môže mikroorganizmus infikovať dolné dýchacie cesty, močové cesty a rany imunosuprimovaných pacientov..

Môže sa tiež vykonať počítanie kolónií P. aeruginosa v mikrobiálnych limitných testoch.

zasadený

Agar Cetrimide sa môže použiť ako primárna kultúra. Platňa sa naočkuje do jedného zo svojich okrajov a odtiaľ sa odsaje do zvyšku dosky. Kvapalné vzorky môžu byť zasiate na povrch pomocou drigalského špachtle.

Platne sa inkubujú v aerobióze pri 37 ° C počas 24 hodín inkubácie.

obmedzenia

-Malé percento kmeňov  Pseudomonas aeruginosa neprodukujte pyocyanín, takže môžete interpretovať falošne negatívne.

-Niektoré druhy Pseudomonas klinicky dôležité sú v tomto médiu inhibované.

-Napriek dodržaniu opísaných charakteristík Pseudomonas aeruginosa, musia byť potvrdené ďalšími identifikačnými testami. Test, ktorý by nemal chýbať, je test oxidázy, mal by byť pozitívny.

-Niektoré enterobaktérie môžu rásť v tomto médiu a vyvinúť žltý pigment, ale líši sa od neho Pseudomonas aeruginosa v ktorom pri vystavení platne ultrafialovému svetlu nie je žiadna fluorescencia.

-Serratia marcescens dokáže vyvinúť a produkovať ružový pigment.

-Ak sa plaky naočkované cetrimidovým agarom vystavia počas určitého času pri teplote miestnosti, kmene P. aeruginosa môžu stratiť fluorescenciu pozorovanú pod ultrafialovým svetlom, avšak táto vlastnosť sa získa, ak sa znovu inkubuje pri 37 ° C..

Kontrola kvality

Na testovanie správneho fungovania agaru cetrimidu sa môžu použiť kontrolné kmene, ako napríklad: Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Stenotrophomonas maltophilia ATCC 13637, Escherichia coli ATCC 25922 a Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Očakávané výsledky sú:

  • na P. aeruginosa dobrý rast, s modrozeleným pigmentom a pozitívnym fluoresceínom.
  • S. maltophilia a S. aureus bude čiastočne alebo úplne inhibovaný.
  • Očakáva sa, že Escherichia coli byť úplne inhibovaný.

referencie

  1. Callicó A, Cedré B, Sifontes S, Torres V, Pino Y, Callis A, Esnard S. Fenotypická a sérologická charakterizácia klinických izolátov z Pseudomonas aeruginosa. VacciMonitor. 2004; 13 (3): 1-9.
  2. Laboratóriá Conda Pronadisa. Agarová báza cetrimidu. 2014. K dispozícii na: condalab.com
  3. Laboratories Britania. Agar Cetrimida. 2015. K dispozícii na adrese: britanialab.com
  4. BD Laboratories BD Pseudosel agar (Cetrimide agar). 2013. K dispozícii na adrese: bd.com
  5. Francisco Soria Melguizo Laboratory, C.A. Cetrimidový agar. 2009. K dispozícii na adrese: http://f-soria.es