Agar BHI základ, príprava a použitie

BHI agar alebo agar s infúziou mozgového srdca je výživné pevné kultivačné médium. V španielčine to označujeme ako mozgový infúzny agar. Je to neselektívne kultivačné médium, čo znamená, že sa môžu vyvinúť všetky druhy grampozitívnych a gramnegatívnych baktérií, ako aj niektoré kvasinky a vláknité huby..

Skladá sa z infúzie teľacieho mozgu a srdca, peptického hydrolyzátu živočíšnych tkanív, kazeínového hydrolyzátu pankreasu, chloridu sodného, ​​glukózy, fosforečnanu sodného a agaru..

Je potrebné poznamenať, že agar BHI je jedným z najčastejších kultivačných médií v bakteriologických laboratóriách. Môže sa používať bez doplnkov ako primárna kultúra, subkultúra kolónií získaná v iných selektívnych médiách alebo na udržanie kmeňov v laboratóriu..

Na druhej strane je ideálnym médiom na použitie ako báza pri príprave obohatených médií, ako je krvný agar a čokoládový agar. Ideálne na izoláciu náročných mikroorganizmov z hľadiska výživy. Treba však vziať do úvahy, že keďže obsahuje glukózu, nie je vhodné pozorovať vzory hemolýzy.

Podobne môže byť agar BHI použitý na prípravu špeciálnych prostriedkov na izoláciu patogénnych mikroorganizmov, ktoré sú náročné na rast v bežných médiách, medzi nimi: Haemophilus sp, Francisella tularensis, Corynebacterium diphtheriae a Histoplasma capsulatum.

S prídavkom antibiotika sa agar BHI stáva selektívnym médiom na izoláciu húb.

index

• 1 Nadácia
• 2 Príprava
  • 2.1
  • 2.2 Platne
  • 2.3 Príprava krvného agaru
• 3 Použitie
  • 3.1 Použitie bez doplnkov
  • 3.2 Ako základný agar na prípravu iných médií
• 4 Kontrola kvality
• 5 Referencie

nadácie

Je výživným kultivačným médiom na izoláciu stredne náročných mikroorganizmov, ktoré sú schopné zvýšiť jeho obohatenie pridaním krvi a ďalších výživových doplnkov..

Je to neselektívne kultivačné médium, preto umožňuje rast väčšiny grampozitívnych a gramnegatívnych baktérií, ako aj niektorých húb. Môže sa však stať selektívnym s pridaním antibiotík.

Médium obsahuje infúziu teľacieho mozgu a srdca, peptidový hydrolyzát zo živočíšnych tkanív a kazeínový pankreatický hydrolyzát; všetky tieto zlúčeniny pôsobia ako zdroje vitamínov, aminokyselín, dusíka a uhlíka.

Glukóza je sacharid, ktorý poskytuje energiu mikroorganizmom, keď ho fermentujú. Zatiaľ čo chlorid sodný a fosforečnan sodný udržujú osmotickú rovnováhu a poskytujú pH blízke neutrality. Nakoniec agar dodáva médiu pevnú konzistenciu.

príprava

Navážte 52 g dehydratovaného média a rozpustite v jednom litri destilovanej vody. Zmes sa privedie do zdroja tepla, až sa varí, pričom sa často mieša počas procesu rozpúšťania.

Môžete pripraviť kliny alebo platne z agaru BHI bez prísad.

kliny

Na prípravu klinov slúži prípravok až do naplnenia polovice každej skúmavky, prikryje sa a sterilizuje sa v autokláve pri teplote 121 ° C počas 15 minút, pričom sa nechá ležať na podložke, kým nestuhne. Uchovávajte v chladničke až do použitia.

dosky

Rozpustená zmes sa autoklávuje pri 121 ° C počas 15 minút, keď sa nechá vychladnúť na 50 ° C a 20 ml média sa podáva v sterilných Petriho miskách. Môžu tuhnúť, invertovať a skladovať v chladničke, až kým sa nepoužijú. Pred vysadením nechajte platne odobrať izbovú teplotu.

Hodnota pH média by mala byť 7,4 ± 0,2.

Nepripravené médium je béžové a pripravené je svetlo jantárové.

Príprava krvného agaru

Po sterilizácii média sa zmes ochladí na teplotu približne 45 až 50 ° C, potom sa pridá krv (50 ml), jemne sa premieša, aby sa homogenizovala a asepticky sa v každej Petriho miske podá 20 ml. Ak sa na doske vytvoria bubliny, plameň horáka by sa mal rýchlo preniesť cez bubliny, aby sa odstránili.

Podobne sa môžu pripraviť špeciálne médiá pridaním zodpovedajúcich aditív, keď zmes dosiahne teplotu 45 až 50 ° C.

Médium je čerešňovo červené.

aplikácie

Použitie bez doplnkov

BHI agar bez prísad je užitočný ako primárna kultúra a na pestovanie čistých kmeňov mikroorganizmov, ktoré sú stredne alebo stredne náročné na neskoršiu identifikáciu..

Keďže ide o svetlo sfarbené médium, je ideálne na pozorovanie pigmentov a tiež preto, že neobsahuje interferujúce látky, môže sa použiť na vykonávanie biochemických testov, ako sú oxidáza a kataláza, alebo na montáž ďalších biochemických testov z kolónií pochádzajúcich z tejto oblasti. agar.

Podobne, BHI agarové kliny sú široko používané na udržiavanie kmeňov po stanovenú dobu v laboratóriu (bakterioteca)..

Platne alebo kliny zasadené na povrchu bakteriálnymi kmeňmi sa inkubujú pri teplote 37 ° C počas 24 až 48 hodín. Zatiaľ čo pri hubách bude teplota a inkubačný čas závisieť od typu huby, ktorá je požadovaná.

Ako základný agar na prípravu iných médií

S touto bázou sa môžu pripraviť obohatené a selektívne médiá.

obohatený

Jeho hlavnou funkciou je slúžiť ako základ pri príprave krvného agaru na rutinné použitie v mikrobiologických laboratóriách. BHI báza prispieva najmä k izolácii kmeňov Streptococcus sp. Nevýhodou však je, že nie je vhodný na pozorovanie hemolytických vzorcov, pretože obsahuje glukózu.

Používa sa aj na prípravu králičieho alebo konského krvného agaru na izoláciu Haemophilus sp. Pre lepšie výsledky môžete pridať doplnok obohatenia (IsoVitaleX).

Ak vzorky pochádzajú z dýchacieho traktu na agar, môže sa pridať bacitracín, aby sa inhibovala sprievodná flóra a zvýšila sa pravdepodobnosť obnovenia kmeňov. Haemophilus sp.

Na druhej strane, krvný agar (jahňacie alebo ľudské) môže byť pripravený s teluritovým cystínom na izoláciu Corynebacterium diphtheriae. Podobne je užitočné pripraviť agar z králičej krvi, s pridaním cystínu a glukózy na izoláciu Francisella tularensis.

Očkovanie krvných agarových platní sa uskutoční vyčerpaním a inkubuje sa pri 35 až 37 ° C počas 24 až 48 hodín v mikroaerofilnom prostredí (5 až 10% CO).₂).

selektívne

Toto médium s pridaním antibiotík môže nahradiť Sabouraudov agar na izoláciu húb.

Kombinácia BHI agaru s chloramfenikolom - gentamicínom alebo penicilínom -, streptomycínom a konskou krvou je ideálna na izoláciu \ t Histoplasma capsulatum.

V závislosti od mikroorganizmu, ktorý sa má izolovať, sa odporúča inkubácia pri 35-37 ° C alebo pri izbovej teplote v aerobióze. Niekedy je nevyhnutná inkubácia v obidvoch teplotných rozsahoch s použitím 2 platničiek.

Niektoré huby ako Trichophyton mentagrophytes mali by byť inkubované pri izbovej teplote až 7 dní.

Kontrola kvality

Z každej pripravenej dávky sa odporúča inkubovať 1 platňu alebo klin pri teplote 37 ° C počas 24 hodín a overiť, či nedošlo k rastu; Zvlášť dôležité pri príprave krvného agaru, pretože ide o ľahko kontaminované médium.

Na druhej strane môže byť kvalita média vyhodnotená inokuláciou známych alebo certifikovaných štandardných kmeňov a pozorovaním ich vývoja.

V tomto zmysle sa vyhodnotí agar BHI bez prísad, kmeňov Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 alebo Candida albicans ATCC 10231. Inkubujú sa pri 37 ° C v aerobióze počas 24 až 48 hodín. Vo všetkých prípadoch sa očakáva uspokojivý rast.

Na vyhodnotenie krvných agarových platní, kmeňov  Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 alebo Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533.

Bakteriálne kmene sa inkubujú pri 37 ° C v mikroaerofiliku po dobu 24 hodín, zatiaľ čo huba sa inkubuje pri teplote miestnosti vo vlhkej komore po dobu až 7 dní. Vo všetkých prípadoch sa očakáva uspokojivý rast.

referencie

1. Laboratories Britania. Infúzny agar s mozgovým srdcom. 2015. K dispozícii na adrese: britanialab.com.
2. BD Laboratories Agar s mozgovou srdcovou infúziou (BHI). 2013. K dispozícii na adrese: bd.com.
3. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories, S.A. Mozgový infúzny agar. 2009.
4. Neogénne laboratórium. Mozgový infúzny agar. K dispozícii na adrese: foodsafety.neogen.com
5. Gil M. Agarová krv: základ, použitie a príprava. 2018. K dispozícii na: lifeder.com.
6. Prispievatelia Wikipédie. Infúzia mozgového srdca Wikipédia, Voľná ​​encyklopédia. 19. septembra 2018, 03:58 UTC. K dispozícii na adrese: wikipedia.org. Sprístupnené 2. marca 2019.
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologická diagnostika Bailey & Scott. 12 ed. Redakcia Panamericana S.A. Argentína.