Baird Parker Agar základy, príprava a použitie



Baird Parker agar je to pevné, selektívne a diferenčné kultivačné médium. Bol vytvorený v roku 1962 na detekciu a koagulázovo pozitívne počítanie Staphylococcus (Staphylococcus aureus).

Pozostáva z hydrolyzátu kazeínového pankreasu, mäsového extraktu, kvasinkového extraktu, chloridu lítneho, glycínu, pyruvátu sodného, ​​teluritu draselného, ​​agaru a emulzie vaječného žítka..

Agar Baird Parker je založený na schopnosti S. aureus redukciu teluritu a produkciu lecitinázy. Obidve vlastnosti vytvárajú kolóniu so špecifickými vlastnosťami pre tento druh. Preto ponúka veľkú účinnosť pri detekcii tohto mikroorganizmu.

Typické kolónie S. aureus sú čierne alebo tmavo sivé, s bezfarebným okrajom a jasným halo, ktoré ich obklopuje, odlíšia sa od ostatných mikroorganizmov. Tento patogén sa nachádza v klinických vzorkách, vodách, kozmetike a surových alebo varených potravinách.

Jeho diagnóza alebo detekcia je veľmi dôležitá kvôli rôznym patológiám, ktoré produkuje, ako je otrava jedlom, syndróm oparenej kože, syndróm toxického šoku, abscesy, meningitída, septikémia, endokarditída, medzi inými..

index

  • 1 Nadácia
    • 1.1 Výživová sila
    • 1.2 Selektívne
    • 1.3 Diferenciál
  • 2 Príprava
    • 2.1 Emulzia vaječného žĺtka
    • 2.2 Telurit draselný pri 1% hmotn./obj
    • 2.3 Príprava kultivačného média
  • 3 Použite
    • 3.1 Klinické vzorky
    • 3.2 Vzorky potravín
    • 3.3 Vzorky vody
  • 4 Kontrola kvality
  • 5 Odporúčania
  • 6 Referencie

nadácie

Výživná sila

Hydrolyzát kazeínového pankreasu, mäsový extrakt a kvasničný extrakt sú zdrojom živín, vitamínov a minerálnych látok potrebných na všeobecný mikrobiálny vývoj, zatiaľ čo pyruvát a glycín sú zlúčeniny, ktoré podporujú špecifický rast Staphylococcus aureus.

selektívne

Agar Baird Parker je selektívny, pretože obsahuje látky, ktoré inhibujú rast sprievodnej flóry a zároveň podporujú rozvoj S. aureus. Inhibičné zlúčeniny sú chlorid lítny a telurit draselný.

diferenciál

To umožňuje rozlišovať S. aureus zvyšku koagulázovo negatívnych stafylokokov. S. aureus má schopnosť redukovať telurit na čierny kovový telúr bez tvorby čiernych alebo tmavosivých kolónií.

Podobne vaječný žĺtok poskytuje substrátom dôkaz o prítomnosti enzýmu lecitinázy a lipázy. S. aureus je to pozitívna lecitináza, a preto bude okolo kolónie pozorovaný jasný halo, čo znamená, že lecitín bol hydrolyzovaný.

V tomto zmysle, vzhľad na tomto agare čiernych alebo tmavosivých kolónií, svetlý s ľahkým halo okolo, indikuje prítomnosť S. aureus. 

Ak sa vytvorí precipitačná zóna, indikuje, že existuje lipázová aktivita. Niektoré kmene S. aureus sú to pozitívne lipázy a iné negatívne.

V prípade, že S. aureus Ak je lipáza pozitívna, bude pozorovaná nepriehľadná zóna okolo čiernej alebo tmavosivej kolónie a potom číry halo kvôli pôsobeniu lecitinázy..

Kolónie baktérií iných ako S. aureus v tomto médiu sa vyvinú bezfarebné alebo hnedé kolónie, bez halo.

Atypické čierne kolónie možno tiež pozorovať s bezfarebným okrajom alebo bez neho, ale bez číreho halo. Tieto kolónie by sa nemali brať do úvahy, nezodpovedajú S. aureus.

príprava

Emulzia vaječného žĺtka

Vezmite čerstvé kuracie vajcia, dobre umyte a umiestnite 2 až 3 hodiny do 70% alkoholu. Potom sa vajce otvorí asepticky a vaječný bielok sa opatrne oddelí od žĺtok. Potom sa odoberie 50 ml žĺtka a zmieša sa s 50 ml sterilného fyziologického roztoku.

Telurit draselný pri 1% hmotn./obj

Niektoré komerčné domy predávajú 1% teluritu draselného pripraveného na použitie. Pridá sa do média pred stuhnutím média.

Na prípravu tohto roztoku v laboratóriu sa naváži 1,0 g teluritu draselného a rozpustí sa v časti vody. Následne je množstvo vody ukončené na 100 ml. Roztok sa musí sterilizovať filtračnou metódou.

Príprava kultivačného média

Navážte 60 g dehydratovaného média a rozpustite v 940 ml destilovanej vody. Zmes nechajte v pokoji približne 5 až 10 minút.

Za účelom zlepšenia procesu rozpúšťania aplikujte teplo miešaním média. Nechajte minútu variť. Sterilizujte v autokláve pri 121 ° C počas 15 minút.

Nechajte stáť, kým nedosiahne teplotu 45 ° C a pridajte 50 ml emulzie vaječného žĺtku a 10 ml 1% teuritu. Dobre premiešajte a podávajte 15 až 20 ml na sterilné Petriho misky.

Nechajte stuhnúť, aby sa prevrátili v plaquers a skladovať v chladničke až do použitia.

Konečné pH pripraveného média by malo byť 6,8 ± 0,2.

Pred vysadením vzorky počkajte, kým sa doska nezmení na okolitú teplotu. Dosky sa zasiali stríciou alebo vysiatím na povrch pomocou špachtle Drigalski.

Farba dehydratovaného média je svetlohnedá a farba pripraveného média je svetlá jantárová.

použitie

Klinické vzorky

Klinické vzorky sa naočkujú priamo vyprázdňovaním časti materiálu na jednom konci platne a odtiaľ sa strháva vyčerpaním. Inkubujte 24 až 48 hodín pri 35-37 ° C.

Vzorky potravín

Navážte 10 g vzorky potravín a homogenizujte v 90 ml 0,1% peptonovanej vody, v prípade potreby sa pripravia riedenia. Platne sa naočkujú trojmo s 0,3 ml pripravených roztokov a siata sa na povrch špachtľou Drigalski. Inkubujte 24 až 48 hodín pri 35-37 ° C.

Táto metodika umožňuje spočítať získané získané kolónie a je ideálna, ak je prítomná S. aureus nad 10 CFU na g / ml vzorky.

Ak máte podozrenie, že množstvo S. aureus je malá alebo existuje mnoho sprievodných rastlín, odporúča sa obohatiť vzorku v sójovom bujóne s triptikázou s 10% NaCl a 1% pyruvátom sodným. To podporí rast HDP S. aureus a bude brániť rozvoju sprievodnej flóry. Rúry, ktoré sú zakalené, sa naočkujú na agar Baird Parker.

Vzorky vody

Vo vákuovom filtračnom systéme a sterilizovanom sa 100 ml vody prefiltruje a potom sa 0,4 mikrónová mikropórovitá membrána odstráni sterilnou svorkou a umiestni na doštičku Baird Parker. Inkubujte 24 až 48 hodín pri teplote 35 - 37 ° C. Táto technika umožňuje počítanie typických kolónií S. aureus.

Kontrola kvality

Na vyhodnotenie kvality agaru Baird Parker sa môžu použiť známe kmene, ako je napr Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 alebo Proteus mirabilis ATCC 43071.

V prípade kmeňov. \ T S. aureus Je známe, že ATCC redukuje telurit a sú to pozitívne lipázy a lecitináza. Preto musí existovať uspokojivý vývoj a pestovať konvexné kolónie s čiernym stredom a bezfarebným okrajom, s nepriehľadným halo a ďalším svetlejším vonkajším svetlom..

Na druhej strane S. epidermidis v tomto médiu sa očakáva slabý vývoj, sivastohnedé až čierne kolónie, bez jasného halo.

na E. coli a P. mirabilis očakáva sa, že bude úplne alebo čiastočne inhibovaný. V prípade pestovania sa vytvoria hnedé kolónie bez nepriehľadnej zóny, ani číreho halo.

odporúčanie

-Médium by sa po pridaní teluritu a žĺtka nemalo zahrievať.

-Príprava emulzie vaječného žĺtka a jej pridávanie do média je veľmi zraniteľným krokom kontaminácie. Je potrebné dbať na mimoriadnu opatrnosť.

-Ak sú prítomné typické kolónie S. aureus musí byť potvrdený namontovaním koagulózového testu na uvedený kmeň.

-Ak existujú pochybné výsledky s koagulázou, musia sa vykonať iné potvrdzujúce testy.

-Dávajte pozor, aby ste si neplienili prítomnosť typických kolónií S. aureus s atypickými kolóniami čiernej farby.

referencie

  1. Prispievatelia Wikipédie. Baird-Parkerov agar. Wikipédia, Voľná ​​encyklopédia. 15. marec 2017, 19:36 UTC. K dispozícii na adrese: wikipedia.org/ Prístup k 18. februáru 2019.
  2. BD Laboratories. Baird Parker Agar. 2006. K dispozícii na adrese: bd.com
  3. Laboratories Britania. Baird Parker agarová základňa. 2015. K dispozícii na adrese: britanialab.com
  4. Francisco Soria Melguizo Laboratories. 2009. Baird Parker Agar. K dispozícii na adrese: http://f-soria.es/Inform
  5. Laboratories Britania. Telurit draselný. 2015. K dispozícii na adrese: britanialab.com
  6. Alarcón-Lavín M, Oyarzo C, Escudero C, Cerda-Leal F, Valenzuela F. Carrying Staphylococcus aureus enterotoxigénneho typu A, pri nosohltanovom šteku v manipulátoroch s potravinami. Rev Med Čile 2017; 145: 1559-1564
  7. Venezuelský štandard Covenin 1292-89. (1989). Food. Izolácia a počítanie Staphylococcus aureus. K dispozícii v:sencamer.gob.ve