Typy biochemických testov, pre čo sú a na dôležitosti

biochemické testy v mikrobiológii sú súborom chemických testov, ktoré sa vykonávajú na mikroorganizmoch prítomných vo vzorke s cieľom ich identifikácie; Tieto mikroorganizmy sú zvyčajne baktérie. Mikrobiológovi je k dispozícii veľké množstvo biochemických testov.

Voľba týchto testov je však založená na predbežných zisteniach, ako je vzor farbenia podľa Grama a rastové znaky, ktoré umožňujú, aby baktérie boli zaradené do určitej kategórie. Biochemické testy sú založené hlavne na metabolických vlastnostiach každého typu baktérií. 

Nie všetky baktérie majú rovnaké vlastnosti, preto sa skúma, či majú nejaký konkrétny enzým pridaním substrátu a čakaním na reakciu. Obvykle je toto stanovenie dané zmenou farby alebo pH v kultivačnom médiu.

Na spoľahlivú identifikáciu baktérie až po druhovú úroveň sa často vyžaduje menej ako 15 biochemických testov. Vykonanie viacerých biochemických testov môže zvýšiť dôveru v identifikáciu.

Väčšina týchto biochemických testov sa vykonáva v sére alebo krvnej plazme. Môžu sa však vykonávať aj v iných biologických sekrétoch, ako je napríklad moč, mozgovomiechový mok, pleurálna tekutina a stolica..

index

• 1 Klasifikácia
  • 1.1 Univerzálne
  • 1.2 Diferenciály
  • 1.3 Špecifické
• 2 Typy biochemických testov
  • 2.1 Test katalázy
  • 2.2 Test oxidázy
  • 2.3 Test soleného manitolového agaru (MSA)
  • 2.4 Test koagulázy
  • 2.5 Test na ureázu
• 3 Aké sú biochemické testy??
• 4 Význam
• 5 Referencie

klasifikácia

Biochemické testy možno rozdeliť do 3 skupín:

univerzálne

Toto sú testy, ktoré sa môžu vykonať na akejkoľvek vzorke a ktoré vedú mikrobiológa k nasledujúcim biochemickým testom, ktoré sa musia vykonať, aby sa získala spoľahlivá identifikácia..

príklad

Test katalázy a oxidázy.

diferenciály

Toto sú testy, ktoré sa vykonávajú na identifikáciu mikroorganizmov prítomných vo vzorke až po druhovú úroveň.

Identifikácia je založená na výsledkoch kombinácie testov, pretože jednotlivé výsledky nie sú dostatočne informatívne na to, aby sa identifikácia mohla vykonať.

príklad

Testy IMViC a testy využitia cukru.

špecifický

Ide o špecifické testy pre konkrétny súbor druhov alebo subtyp druhov. Tieto testy sa zvyčajne vykonávajú na potvrdenie alebo identifikáciu na úrovni poddruhu. Jednotlivé testy sú informatívne.

príklad

Test y-glutamyl aminopeptidázy.

Druhy biochemických testov

Katalázový test

Katalázový test je test na preukázanie prítomnosti katalázového enzýmu rozložením peroxidu vodíka na kyslík a vodu. Na kvapku peroxidu vodíka (3%) na sklíčku sa pridá malé množstvo baktérií.

Katalázový test je jednoduchý test, ktorý používajú mikrobiológovia na identifikáciu bakteriálnych druhov a na stanovenie schopnosti niektorých mikróbov rozkladať peroxid vodíka produkciou katalázového enzýmu..

Ak sú pozorované bubliny kyslíka, znamená to, že baktéria má katalázový enzým, pretože katalyzuje rozklad peroxidu vodíka na kyslík a vodu. Hovorí sa, že organizmus je katalázovo pozitívny (napríklad: Staphylococcus aureus).

Test oxidázy

Tento test sa používa na identifikáciu mikroorganizmov, ktoré obsahujú enzým cytochróm oxidázu (dôležitý v reťazci transportu elektrónov). Bežne sa používa na rozlíšenie medzi rodinami Enterobacteriaceae a Pseudomadaceae.

Cytochróm oxidáza prenáša elektróny z elektrónového transportného reťazca na kyslík (finálny akceptor elektrónov) a redukuje ho na vodu. Testy oxidázy poskytujú umelé molekuly donora elektrónov a akceptora.

Keď je donor elektrónov oxidovaný pôsobením cytochróm oxidázy, médium sa stáva tmavofialovým a považuje sa za pozitívny výsledok. Mikroorganizmus Pseudomonas aeruginosa je príkladom pozitívnej oxidázovej baktérie.

Agarový test soleného manitolu (MSA)

Tento typ testu je selektívny aj diferenciálny. MSA vyberie organizmy schopné žiť v prostrediach s vysokými koncentráciami soli, ako sú napr Staphylococcus na rozdiel od druhu. \ t Streptococcus, ktorých rast je za týchto podmienok inhibovaný.

Diferenciálna zložka v tomto teste je cukrový manitol. Organizmy schopné používať manitol ako zdroj potravy budú produkovať vedľajšie produkty fermentácie, ktoré sú kyslé, a preto znižujú pH média..

Kyslosť média spôsobí, že indikátor pH, fenolová červeň sa zmení na žltú. Príklady druhov baktérií, ktoré možno touto metódou rozlíšiť: \ t Staphylococcus aureus (pozitívny, pretože ferity manitol) a Staphylococcus epidermidis (negatívny, pretože manitol nekvasí).

Koagulázový test

Koaguláza je enzým, ktorý pomáha zrážať krvnú plazmu. Tento test sa vykonáva na pozitívnych gram-pozitívnych a kataláza-pozitívnych baktériách na identifikáciu Staphylococcus aureus (pozitívna koaguláza) V skutočnosti je koaguláza faktorom virulencie tohto bakteriálneho druhu.

Tvorba zrazenín okolo infekcie spôsobenej touto baktériou ju pravdepodobne chráni pred fagocytózou. Tento test je veľmi užitočný, ak chcete rozlišovať medzi Staphylococcus aureus iných druhov. \ t Staphylococcus ktoré sú negatívne koagulázy.

Test ureázy

Tento test sa používa na identifikáciu baktérií schopných hydrolyzovať močovinu použitím enzýmu ureázy. Bežne sa používa na rozlíšenie pohlavia Proteus iných enterických baktérií.

Hydrolýza močoviny produkuje amoniak ako jeden zo svojich produktov. Táto slabá báza zvyšuje pH média nad 8,4 a indikátor pH (fenolová červeň) sa mení zo žltej na ružovú. Príkladom pozitívnej ureázovej baktérie je Proteus mirabilis.

Na čo sú biochemické testy??

Biochemické testy v mikrobiológii sa používajú na diagnostikovanie chorôb spôsobených mikróbmi a na monitorovanie liečby podávanej na boj proti nim. Okrem toho sa používajú na skríning infekčných chorôb a ich prognózu..

Biochemická identifikácia mikroorganizmov ponúka predstavu o tom, čo tieto mikroorganizmy dokážu robiť, pričom je možné rozlišovať medzi rôznymi kmeňmi rovnakého druhu špecifickými biochemickými profilmi..

Rozdiely v špecifických enzymatických aktivitách informujú o ekológii, fyziológii alebo prirodzenom prostredí mikroorganizmu, ktoré možno v niektorých prípadoch považovať za dôležité informácie..

dôležitosť

Štrukturálne rozdiely vzhľadom na tvar, veľkosť a dispozíciu baktérií v procese identifikácie pomáhajú veľmi málo, pretože existuje mnoho druhov baktérií, ktoré majú podobný tvar, veľkosť a dispozíciu..

Z tohto dôvodu je identifikácia baktérií založená v prvom rade na rozdieloch v ich biochemických aktivitách.

Každý druh baktérií má presne definovaný súbor metabolických aktivít odlišných od všetkých ostatných druhov. Tieto biochemické "odtlačky prstov" sú vlastnosti kontrolované bakteriálnymi enzýmami.

Biochemické testy sú preto dôležité, pretože pomáhajú výskumníkovi správne identifikovať patogény prítomné vo vzorke a týmto spôsobom môžu pacientovi odporučiť vhodnú liečbu..

referencie

1. Beckett, G., Walker, S. & Rae, P. (2010). Klinická biochémia (8. vydanie). Wiley-Blackwell.
2. Clarke, P. H., & Cowan, S. T. (1952). Biochemické metódy bakteriológie. Journal of General Microbiology, 6(1952), 187-197.
3. Gaw, A., Murphy, M., Srivastava, R., Cowan, R., St, D. & O'Reilly, J. (2013). Klinická biochémia (5. vydanie). Elsevier Health Sciences.
4. Goldman, E. & Green, L. (2008). Praktická príručka mikrobiológie (2. vydanie). CRC Stlačte.
5. Harrigan, W. (1998). Laboratórne metódy v potravinárskej mikrobiológii (3. vydanie). Akademická tlač.
6. Vasanthakumari, R. (2009). Praktická mikrobiológia. BI Publikácie Pvt Ltd.