Peptónová vodná báza, príprava a použitie

peptonada vody je to neselektívne kvapalné obohacujúce médium, ktoré sa používa hlavne ako riedidlo pre vzorky potravín alebo iné materiály. Tento prostriedok z chemického hľadiska je veľmi jednoduchý, obsahuje peptón z mäsa, chlorid sodný a vodu.

Má určitú výživnú hodnotu, ktorá umožňuje obohatiť vzorku. Ak sú otrasené baktérie, znamená to, že má schopnosť opraviť životaschopnosť. Je obzvlášť užitočná pri regenerácii baktérií patriacich do čeľade Enterobacteriaceae.

V prípade regenerácie Salmonellas sa odporúča použitie pufrovaného variantu peptonada vody; To slúži ako prostriedok na predbežné obohatenie vzorky, v tomto prípade obsahuje ďalšie prvky, ako je fosforečnan dvojsodný a fosforečnan draselný..

Bežne sa voda peptonada pripravuje pri neutrálnom pH, existujú však aj iné varianty, kde je potrebné, aby pH bolo 8,5 ± 0,2 (alkalické), pretože baktérie, ktoré sa majú izolovať, sú alkalofilné, ako napr. Vibrio cholerae.

Na druhej strane môže byť toto médium použité ako základné médium pre fermentačné testy sacharidov.

index

• 1 Nadácia
• 2 Príprava
  • 2.1 Domáca príprava (nekomerčné)
  • 2.2 Príprava s použitím komerčného média
  • 2.3 Príprava na fermentačné testy
  • 2.4 Ďalšie varianty peptonada vody
• 3 Použite
  • 3.1 Vzorky stolice
  • 3.2 Vzorky potravín
• 4 Kontrola kvality
• 5 Obmedzenia
• 6 Referencie

nadácie

Peptony poskytujú živiny potrebné na vývoj baktérií, najmä aminokyselín dusíka a krátkych reťazcov, zatiaľ čo chlorid sodný udržuje osmotickú rovnováhu.

Okrem toho médium umožňuje dispergovanie, homogenizáciu a opravu bakteriálnych buniek, ktoré boli poškodené priemyselnými procesmi..

Ako riedidlo je ideálne, účinne nahrádza fyziologický roztok (SSF) alebo fosfátový pufor (PBS)..

Rast baktérií je zrejmý pozorovaním turbidity.

príprava

Domáca príprava (nekomerčné)

Navážte 1 g peptónu a 8,5 g chloridu sodného, ​​rozpustite v 1 litri destilovanej vody. Hodnota pH by mala byť nastavená na 7,0. Na to môžete použiť 1 N chlorid sodný.

Príprava s použitím komerčného média

Navážte 15 g dehydratovaného média a rozpustite v jednom litri destilovanej vody. Zmes sa homogenizuje. Ak je to potrebné, zmes sa varí 1 minútu, aby sa podporilo úplné rozpustenie. Podávajte v 100 ml injekčných liekovkách alebo v 10 ml skúmavkách podľa potreby. Autoklávujte pri 121 ° C počas 15 minút.

Ochlaďte a používajte alebo uchovávajte v chladničke. Konečné pH média je 7,2 ± 0,2.

Farba dehydrovaného média je svetlo béžová a pripravená je svetlá jantárová.

Príprava na fermentačné testy

Na predchádzajúcu prípravu - pred sterilizáciou - by sa mal sacharid pridať do konečnej koncentrácie 1% plus indikátor Andrade (kyselina fuchsínová) alebo fenolová červeň (0,018 g / l). Na skúmavky by sa mal umiestniť zvonček Durham na pozorovanie tvorby plynu.

Ďalšie varianty peptonada vody

-Peptónová voda pufrovaná alebo pufrovaná

Obsahuje kazeínový enzymatický hydrolyzát, chlorid sodný, dihydrogenfosforečnan draselný a dodekahydrát hydrogenfosforečnanu sodného. Konečné pH je 7,0 ± 0,2.

Na jeho prípravu sa odváži 20 g dehydratovaného média a rozpustí sa v 1 litri destilovanej vody. Nechajte približne 5 minút stáť. Zahrieva sa 1 minútu až do úplného rozpustenia.

Podľa potreby nalejte do vhodných fliaš. Sterilizujte pomocou autoklávu pri 121 ° C počas 15 minút.

-Alkalická peptonovaná voda

Navážte 25 g dehydratovaného média a rozpustite v 1 litri vody. Postupujte podľa vyššie uvedeného postupu. PH sa pohybuje od 8,3 do 8,7.

použitie

Inokulum sa uskutočňuje umiestnením vzorky priamo.

Používa sa na riedenie vzoriek, najmä ak existuje podozrenie, že môžu byť poškodené baktérie. Zriedenia sú zvyčajne 1:10 a 1: 100.

Inkubujte 24 hodín v aerobióze pri teplote 35 - 37 ° C.

Vzorky stolice

Pri vzorkách stolice, ktorá hľadá salmonelu, sa odporúča použitie pufrovanej alebo pufrovanej vody ako média na predbežné obohacovanie..

Postupujte nasledovne:

Ak sa vytvorí stolica, odoberte 1 g vzorky. Ak sú tekuté, vezmite 1 ml stolice a suspendujte v skúmavke s 10 ml pufrovanej peptonovanej vody. V prípade rektálnych výterov vylejte materiál obsiahnutý v tampóne do skúmavky pufrovanou peptonovanou vodou.

Vo všetkých prípadoch vzorku dobre premiešajte a homogenizujte.

Inkubuje sa pri teplote 37 ° C počas 18 až 24 hodín. Následne sa sub-kultivuje v obohatenom bujóne, ako je napríklad selenitový cystínový bujón alebo tetrationátový bujón pri teplote 37 ° C počas 18 až 24 hodín. Nakoniec sa kultivuje v selektívnom médiu pre salmonelu, ako je napr. SS agar, XLD agar, Hektoen agar, okrem iného..

Vzorky potravín

Peptónová voda sa používa ako obohacujúce médium alebo ako jednoduché riedidlo, ale ak sa hľadajú druhy Salmonella, používa sa ako médium na obohacovanie, ako už bolo opísané..

V potravinách postupujte takto:

Pre tuhé potraviny vážiť 25 g vzorky a pre tekuté potraviny merať 25 ml. Uvedená dávka sa umiestni do baniek obsahujúcich 225 ml peptonovanej vody. Vzorka sa premieša a homogenizuje.

Ak existuje podozrenie, že mikrobiálna záťaž je vysoká, možno vykonať sériové riedenia alebo desatinné miesta na uľahčenie počítania jednotiek tvoriacich kolónie (CFU)..

Počet riedení bude závisieť od typu vzorky a analytickej skúsenosti.

Ak je naopak podozrenie, že mikrobiálna záťaž je veľmi nízka, nie je potrebné riediť. Následne sa subkultivuje v selektívnom médiu.

V prípade potravín z mora, ako sú morské plody, ryby, okrem iného, ​​pri hľadaní Vibrio cholerae alebo iné druhy Vibrio, má sa použiť peptónová voda upravená na pH 8,5 (alkalická peptonovaná voda).

Kontrola kvality

Z každej pripravenej dávky sa jedna až dve skúmavky inkubujú bez inokulácie počas 24 hodín v aeróbii pri 37 ° C. Na konci času sa nesmie pozorovať žiadna turbidita alebo zmena farby.

Na hodnotenie ich účinnosti môžu byť tiež použité dobre známe kontrolné kmene:

Na tento účel sa môžu použiť nasledujúce bakteriálne kmene: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, Salmonella enteritidis ATCC 13076.

Vo všetkých prípadoch sa očakáva uspokojivý mikrobiálny vývoj, ktorý sa pozoruje turbiditou média.

obmedzenia

-Dehydratované médium je veľmi hygroskopické, preto by malo byť udržiavané mimo dosahu vlhkosti.

-Médium sa nemá používať, ak sa pozoruje určitý druh poškodenia.

-Dehydratované kultivačné médium by sa malo skladovať pri teplote 10 - 35 ° C

-Pripravené médium by malo byť uchovávané v chlade (2-8 ° C)..

referencie

1. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B a Velázquez O. Techniky mikrobiologickej analýzy potravín. 2009, 2. vydanie. Fakulta chemická, UNAM. Mexiko. Verzia pre administrátora príručiek a dokumentov (AMyD) Chemickej fakulty UNAM 1. K dispozícii na: http://depa.fquim.unam.mx
2. Laboratories Britania. Pufrovaná voda vo vode. 2015. K dispozícii na adrese: britanialab.com
3. Neogen Laboratories Peptónová voda. K dispozícii na adrese: foodsafety.neogen.com
4. Laboratories Britania. Peptónová voda. 2015. K dispozícii na adrese: britanialab.com
5. Merck Laboratories Pufrovaná peptónová voda. K dispozícii na adrese: merckmillipore.com
6. Laboratóriá Conda Pronadisa. Alkalická peptonovaná voda. K dispozícii na: condalab.com
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologická diagnostika Bailey & Scott. 12 ed. Redakcia Panamericana S.A. Argentína.