Nefelometria v tom, čo sa skladá a aplikácie



nefelometria spočíva v meraní žiarenia spôsobeného časticami (v roztoku alebo v suspenzii), čím sa meria výkon rozptýleného žiarenia v inom uhle, ako je smer dopadajúceho žiarenia.

Keď je častica v suspenzii dosiahnutá lúčom svetla, je tu časť odrazeného svetla, iná časť je absorbovaná, druhá časť je odklonená a zvyšok je prenášaný. Preto keď svetlo dopadá na priehľadné médium, v ktorom je suspenzia pevných častíc, suspenzia sa pozoruje zakalená.

index

  • 1 Čo je nefelometria??
    • 1.1 Disperzia žiarenia časticami v roztoku
    • 1.2 Nefelometer
    • 1.3 Odchýlky
    • 1.4 Metrologické charakteristiky
  • 2 Aplikácie
    • 2.1 Detekcia imunitných komplexov
    • 2.2 Iné aplikácie
  • 3 Odkazy

Čo je nefelometria??

Disperzia žiarenia časticami v roztoku

V okamihu, keď lúč svetla dopadá na častice látky v suspenzii, zmení smer šírenia lúča smer. Tento efekt závisí od nasledujúcich aspektov:

1. Rozmery častíc (veľkosť a tvar).

2. Charakteristiky suspenzie (koncentrácia) \ t.

3. Vlnová dĺžka a intenzita svetla.

4. Vzdialenosť dopadajúceho svetla.

5. Uhol detekcie.

6. Index lomu média.

Nephelometer

Nefelometer je prístroj používaný na meranie častíc suspendovaných v kvapalnej vzorke alebo v plyne. Takže fotobunka umiestnená pod uhlom 90 ° vzhľadom na svetelný zdroj detekuje žiarenie časticami prítomnými v suspenzii.

Tiež svetlo odrážané časticami smerom k fotobunke závisí od hustoty častíc. Obrázok 1 predstavuje základné komponenty, ktoré tvoria nefelometer:

. Zdroj žiarenia

V nefelometrii je životne dôležité mať zdroj žiarenia s vysokým svetelným výkonom. Existujú rôzne typy, od xenónových lámp a ortuťových výbojok, halogénových žiaroviek volfrámu, laserového žiarenia.

B. Monochromátorový systém

Tento systém sa nachádza medzi zdrojom žiarenia a kyvetou, takže sa týmto spôsobom zabráni výskytu žiarenia s rôznymi vlnovými dĺžkami v porovnaní s požadovaným žiarením na kyvete..

V opačnom prípade by fluorescenčné reakcie alebo účinky zahrievania v roztoku spôsobili odchýlky od merania.

C. Čítanie kyveta

Je to všeobecne hranolová alebo valcová nádoba a môže mať rôzne veľkosti. V tomto je riešenie v štúdii.

D. detektor

Detektor je umiestnený v špecifickej vzdialenosti (obvykle veľmi blízko nádrže) a je zodpovedný za detekciu žiarenia rozptýlených časticami suspenzie..

E. Systém čítania

Vo všeobecnosti ide o elektronický stroj, ktorý prijíma, prevádza a spracováva údaje, čo sú v tomto prípade merania získané z vykonanej štúdie.

odchýlky

Každé meranie je predmetom percenta chyby, ktorá je daná hlavne:

Znečistené vedrá: v kyvetách akýkoľvek prostriedok, ktorý je mimo študijného roztoku, ktorý je vo vnútri alebo mimo kyvety, znižuje sálavé svetlo na ceste k detektoru (chybné kyvety, prach prilepený na steny kyvety).

interferencie: prítomnosť niektorých mikrobiálnych kontaminantov alebo zákalu rozptyľuje sálavú energiu, čím sa zvyšuje intenzita disperzie.

Fluorescenčné zlúčeninyIde o zlúčeniny, ktoré pri excitácii dopadajúcim žiarením spôsobujú chybné a vysoké hodnoty hustoty disperzie.

Konzervácia činidiel: nedostatočná teplota systému by mohla spôsobiť nepriaznivé podmienky štúdie a podnietiť prítomnosť zakalených činidiel alebo precipitátov..

Kolísanie elektrickej energie: aby sa predišlo tomu, že dopadajúce žiarenie je zdrojom chýb, pre rovnomerné žiarenie sa odporúčajú stabilizátory napätia.

Metrologické charakteristiky

Keďže sálavý výkon detegovaného žiarenia je priamo úmerný hmotnostnej koncentrácii častíc, nefelometrické štúdie majú v teórii vyššiu metrologickú citlivosť ako iné podobné metódy (napríklad turbidimetria)..

Okrem toho táto technika vyžaduje zriedené roztoky. To umožňuje minimalizovať absorpčné aj odrazové javy.

aplikácie

Nefelometrické štúdie zaujímajú v klinických laboratóriách veľmi dôležitú pozíciu. Aplikácie sa pohybujú od stanovenia imunoglobulínov a proteínov akútnej fázy, komplementu a koagulácie.

Detekcia imunitných komplexov

Keď biologická vzorka obsahuje požadovaný antigén, zmieša sa (v pufrovom roztoku) s protilátkou za vzniku imunitného komplexu.

Nefelometria meria množstvo svetla, ktoré je rozptýlené reakciou antigén-protilátka (Ag-Ac), a týmto spôsobom sú detekované imunitné komplexy..

Túto štúdiu možno vykonať dvoma spôsobmi:

Nefelometria konečného bodu:

Táto technika sa môže použiť na analýzu koncového bodu, v ktorom sa protilátka skúmanej biologickej vzorky inkubuje dvadsaťštyri hodín..

Komplex Ag-Ac sa meria pomocou nefelometra a množstvo rozptýleného svetla sa porovnáva s rovnakým meraním vykonaným pred vytvorením komplexu..

Kinetická nefelometria

Pri tejto metóde sa kontinuálne sleduje rýchlosť tvorby komplexu. Rýchlosť reakcie závisí od koncentrácie antigénu vo vzorke. Merania sa tu berú ako funkcia času, takže prvé meranie sa vykoná v čase "nula" (t = 0).

Kinetická nefelometria je najpoužívanejšou technikou, pretože štúdia môže byť vykonaná za 1 hodinu v porovnaní s dlhým časovým obdobím metódy koncového bodu. Pomer disperzie sa meria tesne po pridaní činidla.

Preto pokiaľ je činidlo konštantné, množstvo prítomného antigénu sa považuje za priamo úmerné rýchlosti zmeny.

Iné aplikácie

Nefelometria sa všeobecne používa pri analýze chemickej kvality vody, na stanovenie zrozumiteľnosti a na kontrolu procesov jej spracovania.

Používa sa tiež na meranie znečistenia ovzdušia, pri ktorom sa koncentrácia častíc určuje z disperzie, ktorú produkujú pri dopadajúcom svetle..

referencie

  1. Britannica, E. (s.f.). Nefelometria a turbidimetria. Získané z britannica.com
  2. Al-Saleh, M. (s.f.). Turbidimetria a nefelometria. Zdroj: pdfs.semanticscholar.org
  3. Bangs Laboratories, Inc. (s.f.). Obnovené z technochemical.com
  4. Morais, I. V. (2006). Turbidimetrická a nefelometrická analýza prietoku. Zdroj: repositorio.ucp.p
  5. Sasson, S. (2014). Princípy nefelometrie a turbidimetrie. Zdroj: notesonimmunology.files.wordpress.com
  6. Stanley, J. (2002). Essentials of Immunology & Serology. Albany, NY: Thompson Learning. Zdroj: books.google.co.ve
  7. Wikipedia. (N. D.). Nefelometria (liek). Zdroj: en.wikipedia.org