Čo je to jednoduché farbenie? Top Funkcie



jednoduché farbenie je rýchly a jednoduchý postup farbenia, pri ktorom sa používa jedno farbivo, preto sa nazýva jednoduché. Používa sa hlavne na stanovenie morfológie a organizácie buniek prítomných vo vzorke.

Prirodzene, bunky nemajú farbu, takže je potrebné ich viditeľne vidieť, keď sú pozorované v mikroskope.

Je dôležité zdôrazniť, že farbivá použité v jednoduchom farbení musia byť zásadité s kladným nábojom (katiónovým), aby sa mohli spontánne viazať na bunkovú stenu a cytoplazmu..

Tieto bunkové štruktúry sú negatívne nabité. Preto je farbivo, pozitívne nabité, priťahované k bunkám a viaže sa na ne spontánne. Všetky bunky prítomné vo vzorke sa teda rýchlo sfarbia.

Farbivá používané v jednoduchom farbení

Existuje niekoľko základných farbív, ktoré sa môžu použiť v mikrobiologickom laboratóriu. Najpoužívanejšie sú:

- Metylénová modrá.

- Kryštálová fialová.

- Malachitová zelená.

- Základný fuchsin.

Všetky tieto farbivá dobre fungujú v baktériách, pretože majú pozitívne nabité (katiónové) farebné ióny (chromofory).

Časy farbenia väčšiny týchto farbív sú relatívne krátke. Zvyčajne sa pohybujú od 30 sekúnd do 2 minút, v závislosti od afinity farbiva.

Je dôležité mať na pamäti, že pred farbením vzorky jednoduchým farbením sa musí vzorka predĺžiť a upevniť na sklíčko (sklíčko); Rozšírená a fixovaná vzorka sa nazýva šmouha.

6 krokov na vykonanie jednoduchého farbenia

Krok 1

Položte sklíčko na vyfarbovací stojan a aplikujte požadované farbivo. Nechajte zodpovedajúci čas.

Za normálnych okolností trvá jednoduché farbenie niekoľko sekúnd alebo niekoľko minút, v závislosti od použitého sfarbenia.

pozorovanie

V tomto kroku je dôležité neprekročiť odporúčaný čas pre použité farbivo, pretože na hárku sa môžu tvoriť kryštály, ktoré produkujú tzv. "Artefakty", ktoré deformujú morfológiu buniek..

Krok 2

Opatrne si opláchnite šmýkadlo destilovanej vody z fľaše, alebo tiež s vodou z vodovodu, ktorá tečie pomaly, kým sa odtok nestane priehľadným. To zvyčajne trvá 5 až 10 sekúnd.

pozorovanie

Neaplikujte prúd vody priamo na škvrnu, aby ste zabránili tomu, aby sila nemohla poškodiť vzorku.

Ak nemáte destilovanú vodu, môžete použiť vodu z vodovodu bez problémov, pretože to neovplyvní výsledok farbenia.

Krok 3

Zasušte podložku absorbčnými papierovými uterákmi v jednom smere a bez otierania. Dbajte na to, aby bola spodná strana sklíčka čistá.

Krok 4

Pozorujte zafarbený náter v mikroskope. Začnite s najvzdialenejšími cieľmi, aby ste správne lokalizovali oblasť, ktorú chcete pozornejšie sledovať. Zmeniť cieľ dostať bližšie a bližšie k vzorke.

pozorovanie

Na použitie šošovky s najvyšším zväčšením (normálne 100x) by sa mal použiť imerzný olej, pretože pomáha svetlu lepšie preniknúť a obraz ostrejší. Nie je nutné použiť krycie sklíčko.

Krok 5

Nakoniec zlikvidujte všetky vzorky vo vhodnej nádobe, ktorá je riadne označená ako "biologicky nebezpečný"..

referencie

  1. (2001). Mikrobiologické aplikácie: Laboratórny manuál vo všeobecnej mikrobiológii (8 th ed.). Spoločnosti McGraw-Hill.
  2. Harisha, S. (2006). Úvod do praktickej biotechnológie (1st). Firewall Media.
  3. Moyes, R. B., Reynolds, J., & Breakwell, D. P. (2009). Predbežné farbenie baktérií: Jednoduché škvrny. Súčasné protokoly v mikrobiológii, (SUPPL 15), 1-5.
  4. Pommerville, J. (2013). Alcamo laboratórium Základy mikrobiológie (10th). Jones & Bartlett Učenie.
  5. Prescott, H. (2002). Laboratórne cvičenia v mikrobiológii (5 th). Spoločnosti McGraw-Hill.
  6. Sumbali, G. & Mehrotra, R. (2009). Princípy mikrobiológie (1st). Vzdelávanie Tata McGraw-Hill.