Príprava kultúrnych médií, z čoho pozostáva, ciele a kroky

príprava kultivačných médií Je to rutinná metodológia používaná v laboratóriách na rast požadovaných mikroorganizmov. Kultivačné médiá sú tuhé, kvapalné alebo polotuhé prípravky, ktoré majú všetky živiny potrebné na vývoj mikrobiálnej populácie.

Všeobecne platí, že prostriedky na pestovanie mikroorganizmov sú bohaté na bielkoviny a aminokyseliny a zvyčajne obsahujú určitú zložku, ktorá podporuje rast organizmu, ktorý chcete študovať, ako napríklad vitamíny, krv, sérum..

Neexistuje žiadne všeobecné alebo univerzálne kultivačné médium, pretože jeho zloženie sa líši podľa potrieb mikroorganizmu, ktorý je predmetom záujmu. Niektoré baktérie sa môžu vyvinúť v akomkoľvek kultivačnom médiu, ale iné majú špeciálne požiadavky.

index

• 1 Z čoho sa skladá??
  • 1.1 Agar
  • 1.2 Tekutiny
  • 1.3 Výťažky
  • 1.4 Peptones
  • 1.5 Tlmiče nárazov
• 2 Ciele
• 3 Typy médií
  • 3.1 Na základe jeho zloženia
  • 3.2 Na základe typu mikroorganizmu
• 4 kroky
• 5 Referencie

Z čoho sa skladá??

Mikroorganizmy, ako sú huby a baktérie, nie je možné študovať individuálne kvôli ich malej veľkosti. Preto sa musia pestovať umelými prostriedkami, ktoré umožňujú výrazný nárast obyvateľstva.

Napríklad, ak chceme študovať baktérie, musíme im poskytnúť správne podmienky, aby sa mohli množiť a tvoriť kolóniu (ktorú možno pozorovať voľným okom)..

Príprava kultivačného média sa veľmi líši v závislosti od typu mikroorganizmu, ktorý sa chce kultivovať. Pred prípravou je potrebné poznať základné potreby výživy tela práce.

Ďalej budú opísané najbežnejšie zložky používané v kultivačných médiách, aby mali všeobecnú predstavu o ich príprave:

agar

Používa sa v plodinách ako želírovacie činidlo a pridáva sa pri hľadaní pevného alebo polotuhého média. Prvým spevňujúcim činidlom použitým pri príprave média bola želatína, ale v roku 1883 bol do sveta bakteriológie zavedený W. Hesse..

Bakteriologický agar má ako svoju hlavnú zložku polysacharid komplexných vetiev extrahovaných z rias. Táto zlúčenina sa používa ako zahusťovadlo pre bežné potraviny, ako je zmrzlina a džemy.

Je veľmi cenným prvkom v mikrobiológii z niekoľkých dôvodov. Predovšetkým preto, že mikroorganizmy ho nedegradujú, skvapalňujú pri teplote 100 ° C a zostávajú v kvapalnom stave až do dosiahnutia 45 ° C alebo menej.

V prípade, že chcete pripraviť pevné médium, koncentrácia agaru by mala byť okolo 1,5%, zatiaľ čo polotuhé látky by mali byť pripravené od 0,3 do 0,5%..

tekutiny

Kultivácia patogénnych organizmov vyžaduje telesné tekutiny, aby sa mohli vyvíjať tak, ako by boli v ich prirodzenom prostredí. Z tohto dôvodu sa pridá celá alebo defibrilovaná krv. Tekutina sa extrahuje zo zdravého zvieraťa a po sterilizácii sa pridá do kultivačného média.

výňatky

Získavajú sa z rôznych živočíšnych častí (ako je mäso alebo pečeň) alebo zeleniny (semená) a spracovávajú sa tak, aby sa získal tuhý koncentrát vo forme pasty alebo prášku. Najbežnejšie sú kvasnice, slad a mäso.

Peptonas

Tieto organické zlúčeniny sa získajú enzymatickou alebo chemickou hydrolýzou živočíšnych alebo rastlinných tkanív. Účelom je pridať obsah bohatý na aminokyseliny, ktoré sú základnými jednotkami proteínov.

Tlmiče nárazov

Tlmivé roztoky alebo tlmivé roztoky zabraňujú náhlym zmenám pH a pomáhajú udržiavať optimálny rozsah, ktorý telo toleruje.

Väčšina organizmov sa môže správne vyvíjať pri pH 7, hoci niektoré baktérie preferujú alkalické médiá. Existujú však baktérie, ktoré odolávajú zmenám pH medzi hodnotami 6 a 9.

U druhov citlivých na pH nie je poškodenie spôsobené nadmerným množstvom vodíkových alebo hydroxylových iónov, ale zvýšením slabých kyselín alebo zásad, ktoré môžu preniknúť do bunky..

Tiež sa pridávajú indikátory, ktoré pH monitorujú a vyhýbajú sa odchýlkam spôsobeným fermentáciou alebo inými procesmi.

ciele

Hlavným cieľom pri príprave kultivačného média je pridanie všetkých potrebných zložiek, aby sa umožnil úspešný vývoj organizmu, ktorý chce byť izolovaný. Na dosiahnutie požadovaného média sa musí identifikovať najúčinnejšia kombinácia zložiek a živín.

Príprava a skladovanie média sú rozhodujúce pre zabezpečenie úspešného rastu, pretože tieto kroky závisia od zloženia životného prostredia a dostupnosti živín..

Treba vziať do úvahy, že kultivácia mikroorganizmov je úlohou, ktorá je ovplyvnená viacerými faktormi, ktoré sú mimo kultivačného média, ako je intenzita prijatého svetla, teplota a úroveň kyslosti alebo zásaditosti média. Preto sa musí zohľadniť každá z týchto premenných.

Druhy médií

Na základe jeho zloženia

Na základe svojho zloženia existujú tri hlavné druhy plodín: prírodné alebo empirické, polosyntetické a definované syntetické alebo chemické prostriedky.

Prírodné prostredie

V prirodzenom prostredí nie je známe presné zloženie. Patria sem prísady ako mlieko, zriedená krv, zeleninové šťavy, výťažky a infúzie mäsa a peptonov. Z ekonomických dôvodov sa často pridávajú nízkonákladové zložky, ako napríklad sójový extrakt, srvátka, melasa atď..

Polosyntetické médiá

Nazýva sa polosyntetické médium, ak je jeho zloženie čiastočne známe. Akékoľvek médium obsahujúce agar sa stáva polosyntetickým médiom.

Medzi nimi máme okrem iných príkladov papa dextrózový agar, agap z czapek-dox, ovsený agar, agar z peptónového mäsa.

Syntetické alebo chemicky definované médium

V tomto prípade je zloženie média - čo sa týka množstva uhlíka, dusíka, síry, fosforu a iných zdrojov rastového faktora - úplne známe. Je veľmi užitočné, ak chcete získať reprodukovateľné výsledky pre iných výskumníkov.

Pre tzv. "Mikroorganizmy so špeciálnymi rastovými požiadavkami" je potrebné pridať potrebné zložky. Príkladom tohto typu sú Lactobacillus.

Na základe typu mikroorganizmu

Podobne existuje iná klasifikácia kultivačných médií založená na type mikroorganizmu, ktorý v ňom môže rásť. Podľa tohto princípu máme nasledujúce všeobecné prostriedky obohatenia, selektívne a diferenciálne. Každá z nich je opísaná nižšie:

Všeobecné prostriedky

Tieto priznávajú vývoj širokej škály mikroorganizmov. Ak nejaký organizmus potrebuje pre svoj rast špeciálne podmienky, nebude sa v tomto druhu plodín úspešne vyvíjať.

Prostriedky na obohacovanie

Prostriedky obohacovania podporujú rast určitého typu mikroorganizmov, ale nebola pridaná žiadna látka, aby sa v ňom zabránilo množeniu iných druhov mikróbov..

Selektívne médiá

Hľadajú špecifický rast mikroorganizmu, nazývajú ho okrem iného huby, baktérie, prvoky. Aby to urobili, bránia rozvoju iných.

Na dosiahnutie tohto cieľa môžu byť pridané smrtiace chemické zlúčeniny pre veľkú skupinu mikroorganizmov a neškodné pre organizmus, ktorý je predmetom záujmu, alebo pridať zdroje energie, ktoré môže mikrób hľadať iba.

Selektívne médiá sa používajú pri odoberaní lekárskych vzoriek s cieľom pestovať patogénny mikroorganizmus. Tu je potrebné uprednostniť rast patogénu a inhibovať vývoj normálnej mikrobiálnej flóry od pacienta.

Napríklad siričitanový bizmutový agar neumožňuje rast grampozitívnych baktérií a veľkého množstva baktérií nachádzajúcich sa v gastrointestinálnej dutine. Preto sa používa na kultiváciu gramnegatívnych baktérií, ktoré spôsobujú brušný týfus, Salmonella typhi vo vzorkách výkalov.

Rozdielne médiá

Tento typ využíva určitú diagnostickú funkciu organizmu, ktorý je predmetom záujmu (napríklad zvláštnosti v jeho metabolizme), aby bol schopný identifikovať ich proti inému druhu, ktorý rastie v rovnakom prostredí.

Diferenciálne médiá aj selektívne médiá sú veľmi užitočné v oblasti klinickej mikrobiológie a verejného zdravia, pretože tieto disciplíny potrebujú zistiť prítomnosť špecifických mikroorganizmov súvisiacich so zlými hygienickými podmienkami alebo podmienkami..

Indikátorové látky môžu byť pridané k plodine, ktorá dáva charakteristickú charakteristiku požadovanej kolónii. Napríklad agar-eozín-metylénová modrá (skrátene EMB) a MacConkey-agar sú pridané s laktózou a pH indikátorom.

Keď sa teda v týchto médiách vyvinie kolónia so schopnosťou fermentovať laktózu a produkovať aldehydy, môžu sa pozorovať v špeciálnej farbe..

kroky

V súčasnosti sa kultivačné médium môže kúpiť v lyofilizovanej forme. Preto je prípravok uľahčený a iba produkt je rehydratovaný. Obsah sa musí odvážiť (berúc do úvahy konečné množstvo, ktoré chcete pripraviť) a rozpustiť v destilovanej vode po všetkých indikáciách výrobku..

Obsah kvapalného média sa musí rozdeliť na požadované nádoby (Petriho misky, skúmavky atď.) Na následnú sterilizáciu. Na distribúciu pevného média je potrebné ho roztaviť pomocou mikrovlnnej rúry alebo vystavením materiálu vodnému kúpeli. PH média sa musí upraviť.

Obvykle sa agar používa v skúmavkách alebo v Petriho miskách. Ak agar tuhne v šikmej polohe s príslušným uhlom tak, aby konečný koncový okraj bol uhlopriečny, toto usporiadanie je známe ako vrcholové alebo šikmé rúrky. Keď agar tuhne v úplne vertikálnej polohe, nazýva sa "hlboká".

Po sterilizácii média - pomocou autoklávu - sa nechajú vychladnúť. S nimi sa musí manipulovať v prostredí bez mikroorganizmov, najbežnejšia je práca so zapáleným zapaľovačom, ktorý zabezpečuje aseptické prostredie v jeho okolí.

referencie

1. Celis, J. E. (2006). Bunková biológia: laboratórna príručka (Vol. 2). Elsevier.
2. Finegold, S.M., Bailey, W.R., Baron, E.J., Fineglod, S.M., & Scott, E.G. (1991). Bailey Scott: mikrobiologická diagnostika. Pan American Medical.
3. Olivas, E. (2004). Príručka postupov mikrobiológie I a II a parazitológie. Autonómna univerzita v Ciudad Juárez.
4. Schlegel, H. G., & Zaborosch, C. (1993). Všeobecná mikrobiológia. Cambridge University Press.
5. Tortora, G. J., Funke, B.R., a C. L. (2007). Úvod do mikrobiológie. Panamericana Medical.