Polovica SIM nadácie, príprava a použitie

polovica SIM karty Je to polotuhý a diferenciálny agar, špeciálne navrhnutý tak, aby pomáhal pri identifikácii niektorých baktérií, najmä čeľade Enterobacteriaceae. Skladá sa z tripteínu, peptónu, síranu železitého, síranu amónneho, tiosíranu sodného a agaru.

Toto médium umožňuje vykonanie troch dôležitých testov: produkciu sírovodíka (H₂S), tvorba indolu a pohyblivosť, teda skratka SIM. Vzhľadom k svojej veľkej užitočnosti nemôže chýbať v bakteriologickom laboratóriu.

Na rozdiel od iných médií musí byť polotuhá, aby sa zistila prenosová kapacita niektorých baktérií. V tomto zmysle tento test funguje veľmi dobre pre Enterobacteriaceae, ale nie pre gramnegatívne, nefermentujúce bacily, kde sa uprednostňuje použitie iných metód, ako je napr..

Médium SIM umožňuje rozlíšiť určité špecifické vlastnosti, ktoré charakterizujú niektoré baktérie vo vzťahu k iným. Napríklad Escherichia coli vyznačuje sa tým, že je H₂S (-), indol (+) a pohyblivosť (+), zatiaľ čo Proteus mirabilis je to H₂S (+), indol (-), motilita (+).

index

• 1 Nadácia
  • 1.1 Zdroj energie
  • 1.2 Výroba sírovodíka
  • 1.3 Tvorba indolu
  • 1.4 Motilita
• 2 Príprava
  • 2.1 Polovica karty SIM
  • 2.2 Kovacovo činidlo
  • 2.3 Erlichovo činidlo
• 3 Použitie
  • 3.1
• 4 Kontrola kvality
• 5 Obmedzenia
• 6 Referencie

nadácie

Je to kultivačné médium, ktoré je považované za diferenciálne, pretože jeho použitie dokáže rozlišovať medzi mikroorganizmami, ktoré sú schopné produkovať sírovodík, od tých, ktoré ich nemajú; tiež zdôrazňuje tie, ktoré tvoria indol z tryptofánu z tých, ktoré ho netvoria, a napokon odlišuje motil od imobilných baktérií.

Zdroj napájania

Ako akékoľvek kultivačné médium má prvky, ktoré poskytujú potrebné živiny, aby sa mohli vyvinúť nenáročné mikroorganizmy. Tieto prvky reprezentujú peptony a tripteína.

Vývoj mikroorganizmu v životnom prostredí je nevyhnutný na to, aby bolo možné pozorovať prítomnosť alebo neprítomnosť charakteristík hodnotených týmto médiom.

Výroba sírovodíka

Písmeno S skratky SIM označuje výrobu sírovodíka (H₂S). Baktérie schopné tvoriť sírovodík budú mať síru tiosíranu sodného.

Akonáhle sa vytvorí H₂S - bezfarebné plyny - to reaguje so železnou soľou prítomnou v médiu, ktorá tvorí sulfid železnatý, jasne viditeľný (čierna zrazenina). Baktérie, ktoré netvoria H₂S, nechajte stred pôvodnej farby (béžová).

Prítomnosť čiernej zrazeniny môže brániť interpretácii motility. Je však známe, že väčšina enterobaktérií produkujúcich H₂S sú pozitívna motilita, ako napríklad Salmonella, Proteus a Citrobacter. Okrem toho čierna zrazenina, ktorá pokrýva takmer celé médium, naznačuje pozitívnu motilitu.

Indolový výcvik

Druhé písmeno skratky SIM je "I", čo predstavuje vytvorenie indolu.

V tomto zmysle tripteína okrem toho, že je zdrojom živín, plní ďalšiu základnú funkciu. Tento peptid je bohatý na aminokyselinu nazývanú tryptofán, preto môže vykazovať baktérie, ktoré produkujú tryptofán.

Tento enzým je zodpovedný za vystrihovanie aminokyseliny tryptofánu s následnou tvorbou indolu (bezfarebná látka), kyseliny pyrohroznovej a amónia..

Na demonštráciu tejto reakcie je preto potrebné pridať odhaľujúcu látku (Ehrlichovo činidlo alebo Kovacovo činidlo). Buď jeden reaguje s indolom, čím sa na povrchu agaru vytvorí kruhová červeno-fuchsiová látka. Ak sa javí fuchsiový kruh, indolový test sa interpretuje ako pozitívny.

Baktérie, ktoré tento enzým nemajú, netvoria kruh a sú interpretované ako negatívny indolový test.

Je dôležité zdôrazniť, že indolový test by mal byť posledný, ktorý sa má interpretovať, pretože po pridaní činidla sa médium zakalí, čo sťažuje vizualizáciu motility.

pohyblivosť

Nakoniec písmeno "M" slova SIM znamená pohyblivosť. Aby bolo možné vyhodnotiť pohyblivosť, je toto médium strategicky polotuhé, pretože táto vlastnosť je nevyhnutná na to, aby bolo možné pozorovať, či dochádza k pohybu baktérií alebo nie. Baktérie, ktoré majú bičík, sú tie, ktoré dávajú tento pozitívny test.

Pozitívny test bude zrejmý, keď sa pozoruje turbidita, ako v počiatočnom inokule, tak aj okolo neho. Aj keď sa nemobilné baktérie vyvíjajú iba v počiatočnej dráhe inokula.

príprava

Polovica karty SIM

Navážte 30 g dehydratovaného média a rozpustite v jednom litri destilovanej vody. Zmes sa nechá stáť 5 minút a potom sa zahrieva k varu, často sa mieša až do úplného rozpustenia..

Zmes sa rozdelí do skúmaviek s vatovým vekom a autoklávuje sa 15 minút pri teplote 121 ° C. Stojan na skúmavky vyberte z autoklávu a nechajte ho stuhnúť vo vzpriamenej polohe tak, aby médium malo tvar bloku..

Na uskladnenie sa uchováva v chladničke až do použitia. Pripravené médium musí mať konečné pH 7,3 ± 0,2.

V okamihu inokulácie média musí byť pri izbovej teplote. Farba média je béžová.

Kovacovo činidlo

Odmerajte 150 ml amylu alebo izoamylu alebo butylalkoholu. (Použite jednu z troch uvedených možností).

10 g p-dimetylaminobenzaldehydu sa rozpustí. Potom sa pomaly pridá 50 ml koncentrovanej kyseliny chlorovodíkovej.

Reagencia pripravená na použitie je bezfarebná alebo svetložltá. Mal by sa uchovávať v jantárovej fľaši a skladovať v chladničke. Nepoužívajte, ak má tmavohnedú farbu; znamená, že je poškodený. Toto činidlo je výhodné, keď sa jedná o enterobaktérie.

Erlichovo činidlo

Navážia sa 2 g p-dimetylaminobenzaldehydu a rozpustí sa v 190 ml absolútneho etylalkoholu a pomaly sa mieša so 40 ml koncentrovanej kyseliny chlorovodíkovej. Kovacovo činidlo uchovávajte rovnakým spôsobom. Ehrlichovo činidlo sa používa viac pre nefermentujúce a anaeróbne baktérie.

aplikácie

SIM médium je vysoko používané v bakteriologických laboratóriách. Výhodou je, že v rovnakej skúmavke možno pozorovať tri základné charakteristiky pri identifikácii Enterobacteriaceae.

zasadený

Správnym spôsobom zasiatia tohto média je použitie ihly, s ktorou sa odoberá časť čistej kolónie, ktorá sa má študovať, a vloží sa do stredu média vertikálne. Musí sa urobiť jeden ťah. Prepichnutie by sa nemalo dostať na dno skúmavky, správna vec je pokryť iba dve tretiny hĺbky.

Neodporúča sa opakovať inokulum, pretože to môže viesť k falošným interpretáciám pozitívnej motility. Naočkované médium sa inkubuje v aerobióze pri 37 ° C počas 24 hodín.

Uzavretý čas je pozorovaný, ak bola alebo nebola produkcia H₂Číta sa S a motilita. Nakoniec sa objaví indol, pridajú sa 3 až 4 kvapky Ehrlichovho alebo Kovacovho činidla, jemne sa mieša a interpretuje sa..

Kontrola kvality

Ako kontrola sterility sa jedna alebo dve skúmavky inkubujú bez inokulácie v sušiarni pri 37 ° C počas 24 hodín. Očakáva sa, že po tomto čase nedôjde k žiadnemu rastu alebo zmene farby.

Ako kontrola kvality sa môžu použiť certifikované známe kmene, ako napríklad: Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella sonnei ATCC 29930, Proteus vulgaris ATCC 13315.

Očakávané výsledky sú: Escherichia coli H₂S negatívna, indolová a pozitívna motilita, Enterobacter aerogenes len pozitívna motilita, Salmonella typhimurium H₂S a pozitívna motilita, s negatívnym indolom. Proteus vulgaris všetky pozitívne, zatiaľ čo Klebsiella pneumoniae a Shigella sonnei všetky negatívne.

obmedzenia

-Niektoré kmene Morganella morganii, medzi inými kmeňmi môže produkovať hnedastý pigment v tomto médiu v dôsledku produkcie melanínu, čo by sa nemalo zamieňať so zrazeninou sulfidu železitého. V neskúsených odborníkoch táto situácia môže vyvolať falošne pozitívne výsledky pri interpretácii H testu₂S.

-Prísne aeróbne baktérie budú rásť len na povrchu trubice, čo sťažuje interpretáciu pohyblivosti.

referencie

1. BD Laboratories BBL SIM Medium. 2008. Dostupné na adrese: bd.com
2. Neogen Laboratories Médium SIM. K dispozícii na adrese: foodsafety
3. Difco Francisco Soria Melguizo. Médium SIM. 2009. K dispozícii na adrese: http://f-soria.es
4. Laboratórium Brizuela-Lab Médium SIM. K dispozícii na adrese: .brizuela-lab.com
5. Laboratories Britania. Médium SIM. 2015. K dispozícii na adrese: studyres.es/doc
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. 5. vydanie. Redakcia Panamericana S.A. Argentína.