MIO stredná nadácia, príprava a použitie



polovica MIO je biochemický test, ktorý sa používa na identifikáciu druhov baktérií patriacich do čeľade Enterobacteriaceae. Je celkom výživný a pozostáva z glukózy, kvasnicového extraktu, peptónu, tripteínu, hydrochloridu L-ornitínu, bromokrezolovej purpurovej a agarovej živice..

Význam jeho skratky (MIO) opisuje každý z parametrov, ktoré možno v tomto médiu pozorovať; motility, indolu a ornitínu. Motilita je schopnosť mikroorganizmu pohybovať sa prítomnosťou bičíka. Aby sa táto vlastnosť mohla pozorovať, konzistencia média musí byť polotuhá, takže prípravok má menšie množstvo agaru..

Produkcia indolu dokazuje prítomnosť tryptofanázového enzýmu, ktorý pôsobí na aminokyselinu tryptofán, pričom je nevyhnutné použitie odhaľovacieho činidla, aby bola viditeľná indolová produkcia..

Nakoniec ornitín určuje, či je baktéria schopná dekarboxylácie aminokyseliny, to znamená, ak má enzým dekarboxylázu orinitínu..

index

  • 1 Nadácia
    • 1.1 Peptón, kvasinkový extrakt a tripteín
    • 1.2 Motilita
    • 1.3 Glukóza
    • 1,4 L-ornitín
    • 1,5 pH indikátor
  • 2 Technika výsevu a vývoja
  • 3 Príprava
    • 3,1 MIO Médium
    • 3.2 Kovacsovo činidlo (indolový testovací vývojár)
  • 4 Použite
  • 5 Kontrola kvality
  • 6 Referencie

nadácie

Peptón, kvasinkový extrakt a tripteín

Tieto prvky prispievajú k výživnej sile tohto média. Slúžia ako zdroj živín a esenciálnych aminokyselín pre vývoj baktérií.

Okrem toho tripteín je zdrojom tryptofánu na dôkaz prítomnosti enzýmu tryptofanázy, ktorý degraduje tryptofán redukčnou deamináciou uvoľňujúcou indol, kyselinu pyrohroznovú, amoniak a energiu..

Indol je bezfarebný, takže jeho prítomnosť sa zistí pridaním piatich kvapiek činidla Ehrlich alebo Kovacs, obidva s p-dimetylaminobenzaldehydom.

Aldehydová skupina tejto zlúčeniny reaguje s indolom, čím vytvára na povrchu agaru kruhový fuchsiový produkt..

Akákoľvek stopa farby by sa mala považovať za pozitívny dôkaz. Test by sa mal okamžite prečítať, pretože po chvíli sa farba zhoršuje.

Na druhej strane by mal byť tento test odhalený po zaznamenaní výsledkov motility a dekarboxylácie ornitínu..

interpretácia

Pozitívna skúška: pri pridávaní kvapiek Kovacsovho činidla vznikne červený prstenec fuchsie.

Negatívny test: nie je tvorený krúžkom.

pohyblivosť

Schopnosť pohybovať sa baktériami sa preukáže, ak sa pozoruje zakalené médium alebo ak je hrubá línia rastu, ktorá sa rozširuje okolo počiatočnej inokulácie.

Negatívny test motility bude doložený pozorovaním tenkej línie rastu a všade okolo bude bez rastu.

Je dôležité, aby sa motilita odčítala predtým, ako sa objaví indol, pretože pridanie činidla zakrýva celé médium.

U mobilných, ale pomaly rastúcich baktérií je ťažké demonštrovať ich pohyblivosť s týmto médiom. V tomto prípade sa odporúča použiť iné testy alebo metódy, ako napríklad motilitu alebo metódu drop drop.

glukóza

Glukóza je fermentovateľný sacharid, ktorý okrem toho, že poskytuje energiu okysľuje médium, je nevyhnutnou podmienkou pre dekarboxyláciu aminokyseliny ornitínu, ktorá sa vyskytuje.

Fermentácia glukózy by mala vždy prebiehať na základe princípu, že všetky baktérie patriace do čeľade Enterobacteriaceae fermentujú glukózu.

L-ornitin

Ak baktéria produkuje enzým ornitín dekarboxylázu, môže pôsobiť po okyslení média fermentáciou glukózy..

Enzým ornitín dekarboxyláza pôsobí na karboxylovú skupinu aminokyseliny produkujúcej amín nazývaný putresín, ktorý alkalizuje médium znova.

Tento test by ste si mali prečítať po 24 hodinách inkubácie, pretože ak sa pokúsite čítať skôr, ako môžete chybne interpretovať test s falošne negatívnym výsledkom.

Je potrebné pripomenúť, že prvá reakcia, ktorá nastane, je fermentácia glukózy, takže médium sa v počiatočnej fáze zmení na žltú (prvých 10 až 12 hodín). Ak sa následne objaví dekarboxylácia ornitínu, médium sa zmení na purpurové.

Pred odhalením indolu je dôležité interpretovať dekarboxylačný test ornitínu, pretože pridanie Kovacsovho činidla mení farbu média..

interpretácia

Negatívny test: stredne žltá alebo so žltým pozadím.

Pozitívna skúška: úplne fialová.

Indikátor PH

V tomto prípade sa použije brómkrezol purpur; osoba, ktorá má na starosti odhalenie, keď je v strede zmena pH. Keď sa okyslí, indikátor sa zmení na žltú a keď sa alkalizuje, zmení farbu na fialovú.

Technika osív a vývoj

Na vysadenie média MIO sa použije rovná slučka alebo ihla, pričom sa odoberie časť kolónie, ktorá sa má študovať..

V médiu MIO sa v priamej línii vykoná hlboká punkcia. Neodporúča sa vykonávať dvojitú punkciu, pretože môže spôsobiť falošný obraz motility, ak sa defekty neuskutočnia na rovnakom mieste..

Inkubujte 24 až 48 hodín pri 37 ° C v aerobióze. Sledujte výsledky v tomto poradí: motilita, dekarboxylácia ornitínu a konečne odhalenie indolu.

Odporúča sa asepticky odobrať 2 ml média, preniesť ho do sterilnej skúmavky a vykonať indolový test tam, aby v prípade negatívneho výsledku mohol byť zvyšok pôvodnej skúmavky inkubovaný počas 24 hodín, aby sa indol znova odhalil..

Vývoj indolu sa uskutočňuje nasledujúcim spôsobom: Do MIO média sa pridajú 3 až 5 kvapiek Kovacsovho činidla a intenzívne sa mieša. Pozoruje sa, či sa objaví fuchsiový červený krúžok alebo nie.

príprava

Polovica MIO

Navážte 31 g média MIO a rozpustite v jednom litri destilovanej vody.

Zahrievajte, kým zmes nebude variť jednu minútu, často miešajte, kým sa agar úplne nerozpustí. Rozdeľte 4 ml média v 13/100 skúmavkách s bavlneným viečkom.

Sterilizujte v autokláve pri 121 ° C počas 15 minút. Vyberte z autoklávu a nechajte ho stáť rovno v stojane tak, aby sa vytvoril polotuhý blok.

Uchovávajte v chladničke pri teplote 2-8 ° C. Pred vysadením bakteriálneho kmeňa sa nechá temperovať.

Farba dehydratovaného média je béžová a farba pripravená mierne fialovo opaleskujúca.

Konečné pH pripraveného média je 6,5 ± 0,2

Médium sa zmení na žlté s kyslým pH a pri alkalickom pH je purpurové.

Kovacsovo činidlo (Indole test developer)

Toto činidlo sa pripraví nasledujúcim spôsobom:

Zmeria sa 150 ml amylu, izoamylu alebo butylalkoholu (ktorýkoľvek z troch). V ňom sa rozpustí 10 g p-dimetylaminobenzaldehydu. Potom sa pomaly pridá 50 ml koncentrovanej kyseliny chlorovodíkovej.

Pripravené činidlo je bezfarebné alebo svetložlté. Skladujte v jantárovej fľaši a uchovávajte v chladničke. Tmavohnedá farba ukazuje jej zhoršenie.

Tiež Kovacsovo činidlo môže byť nahradené Ehrlichovým činidlom. Posledne uvedené, ktoré sú citlivejšie, sa uprednostňujú pri odhaľovaní indolu v baktériách, ktoré ho produkujú v minimálnych množstvách, ako v niektorých gramnegatívnych nefermentujúcich baciloch a niektorých anaeróbnych baktériách..

použitie

Toto médium je test, ktorý dopĺňa batériu biochemických testov na identifikáciu baktérií patriacich do čeľade Enterobacteriaceae..

De-karboxylačné údaje ornitínu slúžia na diferenciáciu Shigella sonnei, ktorý dáva pozitívny, z Shigella boydii, Shigella flexneri a S. dysenterieae, ktoré dávajú negatíva.

Rozlišuje tiež rod Klebsiella, ktorý poskytuje negatívny rod rodu Enterobacter, kde je väčšina jeho druhov pozitívna..

Kontrola kvality

Vždy, keď sa pripraví dávka MIO média, môže sa vykonať kontrolný test. Na tento účel sa na pozorovanie správania média používajú známe alebo certifikované kmene.

Použiteľné kmene sú Escherichia coli, Morganella morganii, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes a Proteus mirabilis.

Očakávané výsledky sú E. coli a M. morganii. Dan M: +, I: + a O: +.

Klebsiella pneumoniae dáva všetky záporné (M: -, I: -, O :-). Proteus mirabilis a Enterobacter aerogenes dan M: + I: - a O: +.

referencie

  1. Mac Faddin J. (2003). Biochemické testy na identifikáciu klinicky významných baktérií. 3. vydanie. Redakčná Panamericana. Buenos Aires Argentína.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologická diagnostika Bailey & Scott. 12 ed. Redakcia Panamericana S.A. Argentína.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. 5. vydanie. Redakcia Panamericana S.A. Argentína.
  4. Laboratories Britania. MIO Medio 2015. Dostupné na: britanialab.com
  5. BD Laboratories BBL Motility Indol Ornitín (MIO) Medium. 2007. K dispozícii na adrese: bd.com
  6. Valtek Laboratories Médium M.I.O. Motilita, indol, ornitín. 2010. Dostupné na: andinamedica.com